Colheita de ovário intacto de camundongo: um procedimento cirúrgico para isolar o ovário completo do modelo murino

Resumo

Fonte: Mason, J. B. et al. Procedimentos ortotópicos de transplante de ovário para investigar a influência da senescência ovariana em camundongos fêmeas. J. Vis. Exp. (2018)

Neste vídeo, descrevemos um procedimento cirúrgico para colher ovário intacto de um modelo de camundongo.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Transplante de ovários intactos para camundongos idosos

NOTA: Este protocolo descreve o procedimento utilizado durante a transferência de ovários de um camundongo jovem (60 dias de idade) para uma fêmea pós-reprodutiva (12 meses de idade) da mesma linhagem endogâmica. O mesmo procedimento é usado para transplante de ovário entre duas fêmeas.

1. Pesar e anestesiar o animal doador por injeção intraperitoneal (I.P., agulha de 27 ga), por exemplo, usando um coquetel de cetamina, xilazina e acepromazina (65 mg/kg de cetamina, 13 mg/kg de xilazina 2,0 mg/kg, acepromazina; dose de coquetel - 6,5 ml/kg). Retorne o animal para a gaiola doméstica aquecida até que a anestesia faça efeito.
2. Uma vez anestesiado, retire o animal da gaiola de casa e coloque sobre toalhas de papel aquecidas. Usando uma tesoura (de preferência com a lâmina # 40), remova o cabelo alguns mm lateral à linha média de cada lado, começando logo abaixo das costelas e movendo-se distalmente, preparando um 'remendo' cortado de aproximadamente 2-3 cm quadrados de cada lado do rato deitado, deixando uma tira de cabelo de aproximadamente 1-2 cm cobrindo a linha média.
3. Limpe levemente as áreas cortadas com etanol a 70% e aplique a solução de betadina no local cortado com um cotonete.
4. Aplicar gel antibiótico para proteção ocular e administrar meloxicam (2,0 mg/kg) por via subcutânea (S.C., agulha de 27 ga) na face lateral do pescoço do animal para alívio da dor pós-operatória.
5. Coloque o animal em decúbito ventral em um campo cirúrgico estéril aquecido e limpe a área cortada com uma gaze de algodão de 2 cm x 2 cm embebida em etanol a 70%.
6. Faça uma incisão paralombar de 1,0-1,5 cm e disseque sem corte a pele da fáscia subjacente. Faça outra incisão através da fáscia. Dissecar lateralmente sob esta fáscia o mais superficialmente possível até atingir a cavidade abdominal
7. Coloque um pequeno campo cirúrgico sobre a incisão (corte de gaze de 2 cm x 2 cm) e molhe o campo com solução salina estéril.
8. Usando uma pequena pinça, localize o tecido adiposo que envolve o ovário na cavidade abdominal e extraia suavemente a almofada de gordura e o ovário e coloque-o sobre a cortina de gaze molhada. A almofada de gordura ovariana parecerá "mais branca" do que o tecido adiposo circundante.
9. Coloque uma pinça Bulldog de 1,5 polegada na almofada de gordura (tomando cuidado para não obstruir a bursa ovariana) para manter o trato no lugar durante o procedimento.
10. Mova o microscópio de dissecação para o lugar e identifique claramente a bursa ovariana. Segure a bursa com duas pinças de relojoeiro e faça uma incisão na bursa ovariana oposta ao hilo ovariano para expor o ovário. Se a área de acesso pretendida da bursa for altamente vascularizada, aplique uma gota de epinefrina (1:100.000) com uma seringa na superfície da bursa para reduzir o sangramento no momento da ruptura.
11. Remova suavemente o ovário da bursa ovariana e excise o ovário pinçando o hilo ovariano com uma pinça de relojoeiro para evitar sangramento.
12. Coloque o ovário do doador em um vidro de relógio cheio de solução salina estéril a 4 ° C, cubra frouxamente e reserve até que esteja pronto para o transplante.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Microscópio de dissecação	Qualquer escopo de dissecação com uma distância de trabalho ajustável.
Recirculador de água quente e almofada apropriada para o seu tamanho cirúrgico / campo de recuperação.	Stryker/Gaymar	TP700	As almofadas de água circulante produzem campos de operação e recuperação de temperatura uniformes e consistentes.
Instrumentos cirúrgicos-instrumentos de dissecção para acesso ao trato reprodutivo			A escolha de instrumentos cirúrgicos específicos é altamente específica para o cirurgião
Material de sutura para bursa ovariana	eSuturas	2809G: 9-0 ou 2810G: 10-0 PRETO 5" ETÍLICO BV130-5 CONICIDADE	A sutura 10-0 pode ser difícil de localizar se cair no campo cirúrgico.
Esponja de gelatina absorvível	Pfizer	Gelfoam- PFIZER 09-0315-08	Corte em pedaços pequenos (~ 2 mm) em condições estéreis.
Grampos para fechamento da pele	Becton Dickinson	MikRon Autoclip 9mm (BD 427631)
Pomada para os olhos.	MWI Veterinary Supply Co.		Pomada oftálmica estéril Puralube
Seringas para anestesia, analgesia e epinefrina	MWI Veterinary Supply Co	BD 305536	27g x 3/8in, bisel intradérmico 1/2ml
Seringas para solução salina.	MWI Veterinary Supply Co	BD 309657.	Seringa de 3ml, ponta Luer-Lok, agulha de 27g
Tosquiadeiras/lâmina	Andis	Super AGR+ ™ Cortador de Lâminas Destacável Sem Fio e uma lâmina CeramicEdge® #40.	Qualquer aparador com uma lâmina fina.
etanol	Fornecimento de produtos químicos universitários		diluir a 70% para uso.
Solução Betadine	MWI Veterinary Supply Co.	3233
Compressas de gaze 2x2	MWI Veterinary Supply Co.	3073	autoclavado com pacotes cirúrgicos
Contas de vidro borossilicato	Sigma-Aldrich Co	Z273619	Autoclave em frascos de sintilhação
diepóxido de 4-vinilciclohexeno	Sigma-Aldrich Co.	Rolamento 94956