Instalação da janela de imagem intravital pancreática em modelo de camundongo: uma janela de imagem pancreática integrada para imagens in vivo de lapso de tempo da microestrutura do pâncreas murino

Resumo

Fonte: Park, I. et. al. Visualização longitudinal estabilizada em nível celular in vivo do pâncreas em um modelo murino com uma janela de imagem intravital pancreática. J. Vis. Exp. (2021)

Este vídeo demonstra o procedimento para implantar uma janela de imagem pancreática para separar o pâncreas dos intestinos para imagens longitudinais de alta resolução com lapso de tempo da microestrutura do pâncreas.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Cirurgia

1. Prepare uma plataforma cirúrgica estéril e esterilize as superfícies com etanol 70%.|
   nota: Para sessões de imagem longitudinais, a técnica asséptica é essencial.
2. Anestesiar camundongos com uma mistura de tiletamina/zolazepam (30 mg/kg) e xilazina (10 mg/kg).
   nota: O uso de tiletamina/zolazepam é recomendado em vez de cetamina devido ao seu efeito adverso de hiperglicemia. A anestesia ideal deve ser selecionada para o propósito do experimento.
3. Monitore a temperatura corporal usando uma sonda retal com uma almofada de aquecimento controlada por homeotermia.
4. Raspe o flanco esquerdo do mouse e aplique três rodadas alternadas de álcool e esfoliante à base de iodo.
   nota: Se for usado creme depilatório, não deixe mais de 1 minuto para evitar queimaduras químicas.
5. Faça uma incisão de 1,5 cm no flanco esquerdo do mouse e disseque a pele e o músculo.
6. Faça uma sutura em bolsa com uma sutura preta ou de náilon 4-0 na margem da incisão.
7. Use um micro afastador na incisão e exponha suavemente o baço.
8. Agrupe cuidadosamente o baço com pinças em anel e identifique o pâncreas.
9. Coloque a janela no flanco do mouse e passe o baço e o pâncreas pelo espaço aberto da janela. A manipulação do pâncreas deve ser muito suave, pois pode causar sangramento ou pancreatite.
   nota: Projete a janela de imagem intravital pancreática para isolar o pâncreas do intestino na cavidade abdominal (Figura 1A, B).
10. Coloque suavemente o pâncreas na placa da janela de imagem; o baço será colocado no espaço aberto da janela.
11. Aplique gotas de cola de N-butil cianoacrilato na margem da janela de imagem.
    1. Para minimizar a quantidade de cola aplicada, use uma agulha de cateter 31 G para a aplicação. Se a quantidade da gota for grande, o tecido aderirá involuntariamente à janela ou ao vidro de cobertura.
12. Aplique suavemente uma lamínula redonda de 12 mm na margem da janela de imagem.
13. Puxe o laço de sutura para encaixar na ranhura lateral da janela e amarre-o três vezes.
14. Corte o local proximal máximo do nó para evitar a interrupção de pontos apertados quando esses ratos estiverem acordados.
15. Deixe os camundongos se recuperarem da anestesia (2-3 horas) e injete cetoprofeno (5 mg / kg, subcutâneo na pele solta na base do pescoço ou quadril do animal) para alívio da dor. Reavalie os sinais de dor a cada 12 horas e o cetoprofeno deve ser considerado a cada 24 horas por 1-3 dias.
    nota: A analgesia influencia a secreção de insulina em resposta à glicose. A escolha e o momento da analgesia devem ser individualizados para o propósito experimental.
16. Acomode o mouse na gaiola com roupa de cama suficiente para evitar o contato da janela com a gaiola. Evite abrigar a casa com os ratos sem a cirurgia da janela.

Resultados

Figura 1. Desenho e fotografia da janela de imagem intravital pancreática. (A) Uma visão 3D e transversal da janela de imagem intravital pancreática. (B) Fotografia anterior e posterior da janela de imagem pancreática.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cobertura de vidros circular	Marienfeld	Rolamento 111520	Vidro de cobertura para janela de imagem pancreática
Tesoura IRIS	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	S-1107-10	Este produto pode ser substituído pelo produto de outra empresa
Loctite 401	Henkel	401	Cola de N-butil cianoacrilato
Micro porta-agulhas	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	H-1126-10	Este produto pode ser substituído pelo produto de outra empresa
Micro retractor	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	17004-03	Este produto pode ser substituído pelo produto de outra empresa
Microfórceps	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1034	Este produto pode ser substituído pelo produto de outra empresa
Nylon 4-0	AILEE	NB434	Sutura não absorvível
Omnican N 100 30G	B BRAUN	FT9172220S	Para cateter vascular, use apenas a parte da agulha
Janela de imagem pancreática	Geumto Engenharia	Pedido personalizado	Janela de imagem pancreática - pedido personalizado
Fisiosuíte	Kent Científico	PS-02	Controlador de temperatura homeotérmico
Fórceps de anel	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1090-3	Este produto pode ser substituído pelo produto de outra empresa
Rompun	Bayer	Rompun	Agente anestésico
Zoletil	Virbac	Zoletil 100	Agente anestésico
BALB/C Nu	OrientBio	BALB/C Nu	BALB/C Nu