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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Procedimento de imagem
- Coloque o camundongo em uma câmara de indução para anestesia gasosa e forneça isoflurano a 3% em oxigênio puro até que o animal esteja totalmente anestesiado. Verifique a profundidade da anestesia por falta de resposta ao beliscão da pata.
- Transfira o animal para uma placa aquecida - uma parte constitutiva da estação de imagem UHFUS - mantendo o animal em decúbito dorsal. Use uma sonda retal lubrificada com vaselina para medir a temperatura corporal. Ajuste a temperatura da placa para manter a temperatura corporal do mouse na faixa fisiológica (36 ± 1°C).
- Umedeça os olhos do camundongo com pomada veterinária para evitar o ressecamento durante a anestesia. Forneça gás narcótico (1,5% de isoflurano em oxigênio puro) através da máscara nasal de um rato. Ajuste a porcentagem de isoflurano para manter a profundidade correta da anestesia.
- Cubra as patas dianteiras e traseiras com pasta condutora e cole-as nos eletrodos da placa de ECG embutidos na placa. Verifique se os parâmetros fisiológicos (frequência cardíaca, sinal de respiração e temperatura corporal central) são adquiridos e exibidos corretamente.
- Remova os pelos de ambas as áreas inguinais aplicando um agente depilatório e cubra-os com um meio de acoplamento acústico.
- Prenda a sonda linear UHFUS (frequência central de 40 MHz) em um motor 3D especializado embutido na estação de imagem UHFUS, permitindo o movimento automatizado e gradual da sonda.
- Oriente e ajuste adequadamente a posição da sonda de ultrassom para obter imagens de eixo curto do linfonodo inguinal (esquerda/direita) e coloque a região de interesse na zona focal.
- Escaneie todo o volume do linfonodo inguinal como uma sequência de imagens 2D no modo B, conforme descrito anteriormente. Adquira imagens em vários níveis do linfonodo por movimento linear do transdutor com tamanhos de passo em escala micrométrica, para gerar dados 3D em termos de cine loops controlados automaticamente pela respiração e pelo coração.
- Defina o registro da imagem com os seguintes parâmetros: distância de varredura variando entre 2 e 5 mm (dependendo do tamanho do linfonodo); tamanho do passo 44 μm, com um resultado de 46-114 etapas de varredura/fatias de linfonodo e um tempo de aquisição de 1-3 min por animal. Armazene digitalmente as imagens adquiridas em formato bruto (DICOM) para análises off-line posteriores.