Extração do copo da retina do mouse: um procedimento cirúrgico para obter o copo da retina intacto do olho do mouse

Resumo

Fonte: Jiang, K. et al. Determinação da Respiração Mitocondrial e Glicólise em Amostras de Tecido Retiniano Ex Vivo. J. Vis. Exp (2021)

Este vídeo descreve um protocolo para isolar a ventosa retiniana sem as camadas externas de cobertura do globo ocular de um camundongo. O tecido retiniano extraído pode ajudar a estudar várias vias metabólicas que ocorrem nas células da retina.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Dissecção da taça da retina

1. Eutanásia de camundongo por asfixia por CO₂ seguindo diretrizes institucionais sobre eutanásia.
   nota: Não deixe o animal em uma câmara de CO₂ por mais tempo do que o necessário para a eutanásia.
2. Enuclee os olhos e coloque em um tampão PBS 1x velho em uma placa de Petri e, em seguida, coloque-o sob um microscópio de dissecação.
3. Remova cuidadosamente, cortando com microtesoura, os músculos retos extras presos fora do globo ocular e corte o nervo óptico.
4. Use uma agulha de 30 G para fazer um furo na borda da córnea (limbo); isso serve como local de inserção para a microtesoura. Em seguida, use uma microtesoura de dissecção fina para fazer um corte circular ao longo da borda da córnea, separando-a da ocular posterior.
5. Use uma pinça de dissecção afiada para remover a córnea, o cristalino e o humor vítreo da ocular.
6. Use uma microtesoura de dissecção fina para fazer vários pequenos cortes na camada escleral na borda da ocular. Evite cortar a camada da retina. Use duas pinças de dissecção afiadas para segurar o tecido escleral em cada lado do corte e puxe com muito cuidado a camada escleral para removê-la da retina neural. Repita isso ao redor da ocular até que toda a esclera seja removida e uma concha retiniana intacta seja obtida.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
1X PBS	Thermo Fisher	14190-144
Agulha de calibre 30	BD Precision Glide	305106
Perfurador de biópsia, 1 mm	Integra Miltex	33-31AA
Câmara de asfixia com CO2
Pinça de dissecação-Dumont #5	Ferramentas de Belas Ciências	11251-10	Ponta reta
Pinça de dissecção-Dumont #7	Ferramentas de Belas Ciências	11274-20	Ponta curva
Microscópio de dissecção
Pinça Graefe	Ferramentas de Belas Ciências	11051-10	Ponta curvada e serrilhada
Microtesoura	Ferramentas de Belas Ciências	15004-08	Ponta curva