Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Operação de ressecção apical em camundongo Cx3cr1 GFP/+ neonatal de 1 dia de idade (fundo C57BL/6)
- anestesia
- Retire todos os filhotes de camundongos das gaiolas e coloque-os em uma caixa limpa e seca.
- Incorpore cada rato no gelo por cerca de 2-3 minutos. Certifique-se de que haja uma barreira fina, como látex ou gaze, entre o gelo e o filhote de rato para evitar queimaduras.
- Identifique anestesia suficiente observando os seguintes sinais: pele pálida, falta de movimento dos membros e falta de reflexo podal.
- Toracotomia
- Pré-resfrie a plataforma de operação de bronze durante a noite a -20 °C para ajudar a manter a anestesia.
- Retire o rato anestesiado da caixa de gelo e coloque-o em uma plataforma de operação de bronze. Ancore o mouse na plataforma de operação em decúbito dorsal usando fita adesiva médica.
- Coloque a plataforma operacional com o mouse sob um estereoscópio.
- Desinfete o peito do rato usando uma almofada de preparação embebida em betadina e álcool 70% ou conforme a política institucional.
- Incisar a pele com um corte de 1 cm na quarta área intercostal da cavidade torácica e, em seguida, separar os músculos intercostais usando uma tesoura microcirúrgica até que o coração seja acessado.
- Pressione alternadamente o tórax e o abdômen com a ajuda de duas pinças até que o coração seja exteriorizado para fora do tórax sem nenhum dano mecânico.
- Coloque as costelas abaixo e acima da pequena incisão como uma fixação natural para imobilizar o coração.
- Ressecção do ápice ventricular
- Localize o ápice do ventrículo esquerdo. Corte um diâmetro de 1 mm de tecido do ápice ventricular usando uma tesoura de iridectomia sob um estereoscópio.
- Confirme se a câmara ventricular esquerda está exposta e comece a exsudação.
- Pressione suavemente o coração de volta à cavidade torácica usando um cotonete.
- Suturar os músculos, costelas e pele usando 8-0 Suturas de prolene.
- Limpe bem o mouse após a operação.
- Cuidados pós-operatórios
- Transfira o mouse da plataforma de operação para uma manta de aquecimento a 37 °C para aquecer o corpo imediatamente após a operação.
- Confirme a anabiose do camundongo observando os seguintes sinais: restauração espontânea da respiração, mudança da cor da pele de pálida para rosa e movimento dos membros.
- Leve o camundongo operado de volta para sua mãe assim que ele se recuperar.
- Misture o camundongo operado com os materiais de nidificação de sua mãe, se necessário.
nota: É importante remover todos os filhotes de 1 dia da mãe de uma vez e devolvê-los todos de uma vez depois que todos os filhotes forem recuperados.
