Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Ruptura cirúrgica dos linfáticos da cauda do camundongo
- Use camundongos C57BL/6 de oito semanas de idade com distribuição igual de gênero.
- Coloque um camundongo sob anestesia geral em uma câmara de indução com isoflurano a 3-4% em oxigênio a 100%, seguido de sedação de manutenção a 1-3% durante o procedimento.
- Administrar 0,5 mg/kg de buprenorfina de liberação sustentada (SR) por via subcutânea para controle da dor.
nota: Medicamentos analgésicos adicionais administrados no pós-operatório: Carprofeno uma vez a cada 24 h por pelo menos 48 h e Bupivacaína uma vez após a incisão ou antes de fechar a incisão, aplicada por gotejamento nas bordas da pele (dura até 4 – 6 h).
- Posicione o mouse dorsalmente e prepare a cauda com álcool isopropílico 70%.
- Medir o diâmetro da cauda antes do procedimento em incrementos de 5 mm, começando a 20 mm da base da cauda, utilizando um paquímetro. Essas medidas serão usadas para calcular o volume usando a equação do cone truncado.
- Marque uma excisão circunferencial de 3 mm na cauda a 20 mm da base.
- Realize uma excisão meticulosa de pele de espessura total de 3 mm com uma lâmina cirúrgica estéril (tamanho 15), deixando toda a vasculatura subjacente intacta sob ampliação microscópica cirúrgica. Incisar a marca circunferencial superior (20 mm da base da cauda) primeiro através da derme, seguida por uma incisão circunferencial de espessura total 3 mm distal à primeira incisão
- Faça uma incisão vertical perpendicular de espessura total para conectar as duas incisões. Use um captador fino dentado para segurar uma borda de ataque e use uma microtesoura para dissecar cuidadosamente profundamente dentro do plano avascular até a derme e superficial até a adventícia da veia.
- Injete 0,1 mL de azul de isosulfan (1%) por via subcutânea proximal à ponta da cauda.
- Identifique os dois canais linfáticos adjacentes às veias laterais da cauda sob o microscópio cirúrgico. Os linfáticos parecerão azuis por causa da injeção de isosulfan. Transeccione os linfáticos usando uma tesoura microcirúrgica reta. Use a tesoura para dissecar cuidadosamente um plano entre a veia lateral e a linfática. Em seguida, passe a ponta de uma lâmina de tesoura entre o vaso linfático e a veia lateral e feche as lâminas para transeccionar o vaso linfático.
- Cubra a ferida da cauda com um curativo transparente aderente estéril. Verifique as incisões pós-operatórias diariamente para garantir que não estejam infectadas ou sangrando e cuide da ferida por 2 semanas.
- Alojar os animais individualmente para evitar mais lesões na cauda e evitar que os animais se mordam, o que levaria a complicações cirúrgicas.
