Sonda Doppler a laser de posicionamento: uma técnica para implantar sonda sobre a artéria cerebral média para medição do fluxo sanguíneo em modelo murino

Resumo

Fonte: Llovera, G., et al. Modelagem de AVC em camundongos: oclusão transitória da artéria cerebral média através da artéria carótida externa. J. Vis. (2021).

Este vídeo descreve o procedimento cirúrgico para imobilizar a sonda Doppler a laser sobre a artéria cerebral média do cérebro murino, ou MCA. A sonda ajuda a medir o fluxo sanguíneo na microvasculatura do cérebro, medindo o deslocamento Doppler causado pelo movimento dos glóbulos vermelhos dentro da artéria.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação e posicionamento do laser Doppler

1. Prepare um suporte para a sonda laser Doppler cortando a ponta de uma ponta de pipeta de 10 μL (3-5 mm de comprimento).
   nota: Todos os instrumentos são esterilizados usando um esterilizador de esferas quentes. As superfícies também são desinfetadas antes e depois da cirurgia com um spray desinfetante microbiano. Antes da cirurgia, as áreas ao redor da cabeça e do peito dos camundongos são desinfetadas com um spray de desinfecção de feridas.
2. Injete analgesia no camundongo 30 minutos antes da cirurgia (4 mg / kg de carprofeno e 0,1 mg / kg de buprenorfina, por via intraperitoneal).
3. Anestesiar o camundongo colocando-o na câmara de indução com uma taxa de fluxo de isoflurano de 4% até a cessação do movimento espontâneo do corpo e das vibrissas.
4. Coloque o mouse em decúbito ventral na área de operação com o nariz na máscara de anestesia. Mantenha a concentração de isoflurano em 4% por mais um minuto, depois reduza e mantenha em 2%.
5. Defina a almofada de aquecimento controlada por feedback associada para manter a temperatura corporal do mouse em 37 °C e insira suavemente a sonda retal para monitorar a temperatura durante os procedimentos cirúrgicos.
6. Aplique pomada de dexpantenol em ambos os olhos.
7. Desinfete a pele e o cabelo ao redor do olho esquerdo e da orelha com etanol 70%.
8. Corte o couro cabeludo entre a orelha esquerda e o olho (1 cm de comprimento) para expor o osso do crânio.
9. Corte e retire o músculo temporal para visualizar a ACM abaixo do crânio.
10. Fixe com cola a parte externa da ponta segurando a sonda / fibra Doppler a laser na parte superior do MCA esquerdo com cola. Em seguida, cole a pele para fechar a ferida ao redor do porta-pontas. Aplique 2-3 gotas de cola endurecedora para acelerar o processo. Certifique-se de que a fibra Doppler a laser não esteja colada e possa ser facilmente removida do suporte da ponta a qualquer momento.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Rampa de 45°	H&S Kunststofftechnik		Altura: 18 cm
Seringa de 5 mL	Braun
Sistema de anestesia para isoflurano	Drager
Pomada Bepanthen	Bayer
Camundongos C57Bl/6J	Rio Charles	000664
Etanol 70%	CLN Chemikalien Laborbedorf	521005
Etanol 96%	CLN Chemikalien Laborbedorf	522078
Etanol 99%	CLN Chemikalien Laborbedorf	ETO-5000-99-1
Filamentos	Doccol	602112PK5Re
Pinça angular fina 45	Festa	11251-35
Pinça fina	Festa	11252-23
Tesoura fina	Festa	14094-11
cola	Orechseln	BSI-112
Cola endurecedora	Drechseln & Mehr	BSI-151
Manta de aquecimento	Controlador de temperatura FHC DC
Isoflurano	abade	B506
Doppler a laser	Perimed	PF 5010 LDPM, Sistema de Perifluxo 5000
Sonda Doppler a laser	Perimed	Rolamento 91-00123