Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Colonoscopia e indução de feridas
- Pré-monte os componentes do endoscópio inserindo primeiro o endoscópio de furo rígido de 1.9 mm na bainha (Figura 1A-B). Conecte a bomba de ar (para fornecer insuflação colônica) usando a tubulação fornecida, à válvula de gás no lado esquerdo da bainha ao lado do canal de trabalho (Figura 1C).
nota: Embora a lente descrita aqui seja de 0°, uma lente de 30° também pode ser usada para essa finalidade.
- Certifique-se de que o canal de trabalho esteja na posição aberta e insira uma pinça de biópsia 3 Fr através do canal de trabalho e avance-a até o final da bainha (garantindo que não se projete para fora da bainha) (Figura 1C). Conecte o endoscópio montado à fonte de luz e ao dispositivo de imagem de vídeo de acordo com as instruções do fabricante.
- Anestesiar o camundongo com isoflurano a 5% com oxigênio em uma câmara de indução. Em seguida, mova o mouse para uma plataforma de estadiamento endoscópico contendo um sistema de aquecimento (para evitar hipotermia) em seu lado ventral e mantenha sob anestesia usando um cone nasal com isoflurano a 2% com oxigênio. Adicione pomada veterinária aos olhos para evitar o ressecamento durante a anestesia. Certifique-se de que o mouse esteja totalmente anestesiado apertando suavemente o pé traseiro para testar o reflexo.
nota: Qualquer cepa ou ambos os sexos de camundongos podem ser usados com esta técnica; No entanto, é preferível que os camundongos tenham pelo menos 8 semanas de idade, para que sejam grandes o suficiente para o procedimento.
- Adicione pomada veterinária aos olhos para evitar o ressecamento durante a anestesia.
- Certifique-se de que o mouse esteja totalmente anestesiado, beliscando suavemente o pé traseiro para testar o reflexo.
- Encha uma seringa de 3 mL com uma agulha de gavagem de rato acoplada com solução salina tamponada com fosfato (PBS) à temperatura ambiente. Insira a agulha aproximadamente 1 cm no ânus do camundongo e infunda suavemente PBS para limpar o material fecal. Vários pellets fecais devem sair do camundongo junto com o PBS que foi infundido.
nota: A instilação de um volume excessivo de PBS pode resultar na formação de espuma no lúmen, o que pode obscurecer a visualização do lúmen.
- Insira o endoscópio montado 0,5 cm no ânus do mouse. Avance a pinça de biópsia no lúmen do reto até que as "mandíbulas" completas (incluindo a dobradiça) da pinça estejam além da extremidade da bainha (conforme observado no monitor de vídeo). Gire a pinça 90° para que as mandíbulas se abram na orientação leste-oeste.
- Para a biópsia, abra a pinça e avance aproximadamente 1 cm, feche a pinça e, em um movimento suave, puxe rapidamente a pinça, deixando-a fechada.
- Evite insuflar totalmente o cólon ao realizar a biópsia. Portanto, deixe o lado direito da válvula de gás aberto durante esta etapa; embora deva ser notado que ao abrir a pinça existe o risco de danificar a mucosa quando o cólon está nesta posição.
