Isolamento de miofibras: uma técnica para obter miofibras únicas do músculo extensor longo dos dedos (EDL) de camundongo colhido

Resumo

Fonte: Hüettner, S.S. et al. Ensaio de Cultura de Miofibra Única para Avaliação da Funcionalidade de Células-Tronco Musculares Adultas Ex Vivo. J. Vis. Exp. (2021)

Este vídeo demonstra o isolamento de miofibras únicas do músculo extensor longo dos dedos murino (EDL) colhido. As miofibras isoladas podem ser cultivadas para estudar a atividade das células-tronco musculares associadas à miofibra.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Isolamento do músculo EDL e digestão da colagenase

1. Pulverize todos os equipamentos com etanol 70% para evitar contaminação.
2. Sacrifique o rato de acordo com os regulamentos nacionais para experimentação animal.
3. Pulverize os membros posteriores do camundongo com etanol a 70%. Use tesouras curvas finas endurecidas (ponta de 24 mm) e pinças finas (Dumont 7, curvas ou retas) para remover a pele e expor os músculos subjacentes. Evi....

Resultados

Figura 1. Dissecção de EDL de camundongo e isolamento de miofibra única.(A) A pele do membro posterior do camundongo é removida e o músculo ao redor da fáscia é afastado para expor o músculo TA (tibial anterior). (B) O músculo TA é removido para expor o músculo EDL (extensor longo dos dedos), marcado pela seta branca. (C

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Colagenase tipo 1	sigma	C0130
DMEM (meio de Eagle modificado de Dulbecco com 4,5 g/l de glicose e piruvato de sódio)	GibCo	41966029	Meio de cultura celular
Soro fetal bovino	Gibco	10270-106	Soro fetal bovino