Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Extração cirúrgica do bloqueio cardiopulmonar.
- anestesia:
- Use uma combinação de um sedativo (xilazina) e um barbitúrico (pentobarbital).
nota: Diferentes coquetéis anestésicos podem ser usados sem efeito nos resultados experimentais.
- Primeiro, sedar os coelhos saudáveis da Nova Zelândia com uma única injeção intramuscular de cloridrato de xilazina (3-5 mg / kg). Certifique-se de que os coelhos permanecem calmos e relaxados para permitir uma manipulação adicional após alguns minutos da injeção.
- Após a sedação, use as veias marginais (laterais) da orelha como acesso para anestesiar os coelhos com uma injeção intravenosa de pentobarbital sódico (28 mg / kg).
- monitorização:
- Para evitar anestesia insuficiente ou depressão excessiva das funções cardíacas e respiratórias, monitore os seguintes parâmetros. Para avaliar a profundidade da anestesia, faça um teste de pinça do dedo do pé.
- Certifique-se de que a membrana mucosa esteja rosada. Tons de azul ou cinza indicam hipóxia.
- Certifique-se de que a frequência cardíaca esteja entre 120-135 batimentos/min e que a temperatura corporal não caia abaixo de 36.5 °C.
- Colocação de animais:
- Raspe o torso do coelho e coloque o animal na mesa de operação em decúbito dorsal. Coloque o sistema de ventilação próximo à mesa, atrás da cabeça do coelho, para permitir a conexão da cânula rapidamente após a traqueostomia para evitar danos tecisulares.
- Incisão e traqueostomia:
- Disseque a pele com uma incisão na linha mediana ventral de 3-5 cm do diafragma até o pescoço.
- Com a tesoura cirúrgica, corte os 2/3 anteriores da traqueia entre dois anéis de cartilagem para inserir a cânula traqueal através da membrana fibrosa traqueal.
- Insira um 5 mm (diâmetro externo; OD) através da membrana fibrosa traqueal e use uma sutura de seda 4-0 para fixá-la cuidadosamente.
- Coloque uma pinça ou pinça embaixo da traqueia para garantir que a cânula não dobre contra a traqueia.