Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Preparação Animal
- Sedar um porco por injeção intramuscular (i.m.) de tiletamina (3,75 mg/kg) e zolazepam (3,75 mg/kg) e dexmedetomidina (37,5 μg/kg). Espere que ele fique inconsciente.
- Prepare uma linha intravenosa inserindo uma cânula de 20 G na veia do ouvido.
nota: Certifique-se de que a cânula esteja na veia injetando 5-10 mL de solução salina através da cânula. Se a veia foi perdida, isso será perceptível por um pequeno edema no tecido da orelha.
- Intubar o porco para garantir que a frequência respiratória possa ser regulada durante toda a cirurgia.
nota: Garanta uma intubação bem-sucedida aplicando pressão no tórax do porco e confirme se o ar expirado à força está saindo do tubo de intubação.
- Conecte o tubo de intubação a um ventilador ajustado para uma frequência respiratória de 14 respirações/min.
- Conecte um oxímetro de pulso e um manguito à cauda para monitorar a frequência cardíaca (FC), pressão arterial (PA) e saturação de oxigênio (sats). Insira um termômetro retal para monitorar a temperatura central.
- Prepare uma bolsa intravenosa de cetamina (5 mg/kg/min), midazolam (0,25 mg/kg/min) e fentanil (2,5 μg/kg/min), em solução salina e comece a infundir através da veia do ouvido a aproximadamente 2 gotas/s.
nota: Ao longo da cirurgia, a taxa de infusão pode precisar ser aumentada ou diminuída com base nos sinais vitais do animal.
- Com o porco em decúbito ventral, palpe a parte de trás da cabeça e pescoço do animal para localizar e marcar a crista occipital e a coluna vertebral das primeiras vértebras torácicas e a base de cada orelha.
- Desenhe uma linha reta entre a crista e as vértebras ao longo do eixo longitudinal. Desenhe duas linhas da crista até a base de cada orelha seguindo a base do crânio (Figura 1A).
- Verifique se o animal está em sono profundo apertando cuidadosamente a cauda e observando a ausência de reflexo da cauda.
nota: Se o animal ainda estiver reflexivo, a taxa de infusão de anestésico deve ser aumentada gradualmente até que o animal não exiba mais reflexo.
2. Cirurgia
NOTA: Durante toda a cirurgia, é necessário ter pelo menos um assistente para aspirar o sangramento leve e cauterizar os vasos cortados.
- Usando um bisturi com lâmina # 21, faça uma incisão dérmica ao longo da linha longitudinal até o músculo.
- Estenda duas incisões dérmicas perpendiculares ao longo dos ombros, com 10-15 cm de comprimento.
- A partir das cristas occipitais, faça incisões dérmicas ao longo da linha até a base de cada orelha.
- Segurando os cantos da pele formados na crista occipital com uma pinça anatômica, separe cuidadosamente a pele do músculo subjacente passando levemente a lâmina do bisturi sobre a fáscia, movendo-se do rostral para o caudal. Uma vez que a pele tenha sido ressecada após cada uma das cinco incisões, partes dos músculos trapézios devem ser visíveis.
- Faça uma incisão longitudinal com o bisturi, com aproximadamente 1 cm de profundidade, onde o trapézio se junta na linha média.
nota: Ao cortar os músculos, há uma maior propensão a sangramento, portanto, o cauterizador deve estar pronto. Se um vaso maior for cortado, uma pessoa deve comprimi-lo rapidamente com a gaze, enquanto a outra pessoa usa o cauterizador.
- Usando uma combinação de pinças cirúrgicas retas e curvas, faça uma dissecção romba trabalhando ao longo do corte longitudinal nos músculos. Isso separará as barrigas do trapézio, bem como o músculo biventer semiespinhal do capitus subjacente.
- Corte todas as fibras musculares persistentes com um bisturi e continue a dissecção romba até que o semiespinhal do complexo do capitus se torne visível.
- Corte as origens dos músculos trapézio e semiespinhal do vértice ao longo do aspecto posterior do crânio. Separe-os cuidadosamente longitudinalmente com o bisturi realizando dissecção romba até que o complexo semiespinhal do cabelo esteja totalmente visível.
- Retraia os músculos trapézio e semiespinhal do capito biventter usando afastadores auto-retentores.
- Onde os ventres do semiespinhal do complexo capitus se juntam na linha média, faça uma incisão longitudinal com o bisturi de aproximadamente 1 cm de profundidade.
nota: Esteja ciente de qualquer sangramento adicional aqui. O sangramento pode ser controlado usando uma combinação de cotonetes e cauterização.
- Usando uma pinça cirúrgica, faça uma dissecção romba trabalhando ao longo do corte longitudinal entre os ventres musculares até que o aspecto dorsal do atlas (IC) seja palpável.
- Corte as origens dos músculos semiespinhais do complexo do músculo maior ao longo da face posterior do crânio e separe-o longitudinalmente das vértebras subjacentes por bisturi e dissecção romba.
- Retraia os músculos semiespinhais do complexo do capitus usando outro conjunto de afastadores auto-retentores.
- Usando um bisturi, remova cuidadosamente qualquer tecido remanescente que recobre a região onde o atlas encontra a base do crânio.
- Colocando um braço sob o pescoço do animal e um dedo na junção do atlas e do crânio, eleve simultaneamente a cabeça e flexione o pescoço enquanto palpa com o dedo para revelar a cisterna magna com a outra mão.
nota: A cisterna magna é reconhecível quando palpada como uma forte estrutura elástica com uma pequena quantidade de rebote à medida que a pressão é liberada com o dedo.
