Entrega de moléculas traçadoras na cisterna magna: um método para entregar moléculas traçadoras fluorescentes via canulação direta da cisterna magna em suínos

Resumo

Fonte: Bèchet, N. B., et al. Implantação direta de cânula na cisterna magna de porcos. J. Vis. Exp. (2021).

Este vídeo descreve o protocolo para entrega de moléculas traçadoras por meio de canulação direta da cisterna magna em um cérebro de porco. Este método ajuda a visualizar a distribuição do líquido cefalorraquidiano no sistema glinfático.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Canulação e injeção

NOTA: Esta etapa requer pelo menos duas pessoas e é realizada com a cabeça do animal elevada e o pescoço flexionado.

1. Comece com um porco anestesiado, pré-operado com cisterna magna cirurgicamente acessível.
2. Certifique-se de que uma pessoa eleva e flexiona a cabeça e o pescoço do animal enquanto a outra palpa a cisterna magna, anotando sua localização anatômica.
3. Introduza lenta e cuidadosamente uma cânula de 22 G através da dura-máter e na cisterna magna em um ângulo oblíquo em relação ao eixo longitudinal.
   nota: Não insira a cânula muito fundo, pois isso pode causar danos ao cérebro. Saber até onde inserir a cânula vem com a experiência de entender como é a sensação da cânula perfurar a dura-máter. Essencialmente, assim como a dura-máter foi perfurada, a cânula é profunda o suficiente para uma injeção bem-sucedida do traçador. Esta profundidade é de aproximadamente 3-5 mm, mas será diferente com base no tamanho ou idade do animal. A canulação bem-sucedida deve ser imediatamente evidente através da visualização do LCR claro e pulsátil ascendendo pela cânula. Para obter o melhor resultado, recomenda-se praticar várias canulações previamente em animais sacrificados para entender a perfuração dural.
4. Retraia a agulha da cânula e coloque uma tampa na trava.
5. Primeiro, aplique supercola e um acelerador onde a cânula entra no tecido, seguido da aplicação do cimento dentário. Aguarde 5 min para que o cimento endureça.
6. Remova cuidadosamente a tampa da cânula e prenda a extremidade macho da torneira da linha IV com 10 cm de extensão, com o marcador, à cânula.
7. Injete lentamente o marcador manualmente ou usando uma bomba de microinfusão a uma taxa de 100 μL / min. Remova a torneira de linha IV de 3 vias com 10 cm de extensão e substitua-a pela tampa. O traçador agora deve estar visível pulsando na base da cânula.
   nota: Se injetar manualmente, faça isso até que o traçador ainda esteja visível na haste da cânula, aproximadamente 1-2 mm acima de onde o cimento dental está cobrindo a haste.
8. Após a injeção, coloque sacos de areia sob o pescoço para manter alguma flexão. A cabeça pode então ser liberada e o animal é deixado em uma posição de repouso de bruços.
9. Solte os afastadores auto-retentores e coloque os músculos como estavam antes. Junte a pele sobre os músculos usando grampos de toalha cirúrgica.
10. Cubra as braçadeiras de toalha e a incisão com gaze e, em seguida, um cobertor para limitar a perda de calor.
11. Deixe o marcador circular pelo tempo desejado antes de sacrificar o animal por injeção intravenosa de pentobarbital (140 mg / kg). Confirme a eutanásia pela ausência de sons cardíacos na ausculta com um estetoscópio.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Agulha 18G	Mediq
Seringa de 1ml	FischerSci	15849152
Cânula 20G	Mediq	NA
cânula 22G	Mediq	NA
Albumina de soro bovino Alexa-Fluor 647 Conjugado	ThermoFischer	A34785	2 frascos para injetáveis (10mg)
CaCl2	Sigmaaldrich	C1016
Cimento dentário	Agnthos	Rolamento 7508
glicose	Sigmaaldrich	G8270
Acelerador de CA Insta-Set	BSI-Inc	BSI-151
IV linha TAP, 3 vias com 10 cm de extensão	Bbraun	NA
Kcl	Sigmaaldrich	Pág. 9333
marcador	NA	NA
MgCl2	Sigmaaldrich	M8266
Água MilliQ	NA	NA
NaCL	Sigmaaldrich	S7653
NaH2PO4	Sigmaaldrich	S8282
NaHCO3	Sigmaaldrich	S5761
salino	Mediq	NA
Retractores auto-retentores	NA	NA
Supercola	NA	NA
Tesoura curva cirúrgica	NA	NA
Pinças para toalhas cirúrgicas	NA	NA