Monitoramento multissistêmico de anormalidades epilépticas em coelhos: um método para gravação simultânea de vídeo EEG, ECG, capnografia e oximetria durante convulsões induzidas

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Para permitir que os coelhos se aclimatem nas contenções e para que o investigador confirme objetivamente a estabilização das frequências cardiorrespiratórias, instrumente todos os coelhos com os sensores cardiorrespiratórios e neuronais e realize monitoramento contínuo por vídeo por > 1 hora, 1 a 3 vezes por animal.

2. Experimento de medicação intravenosa (Pentilenotetrazol, PTZ)

1. Para visualizar a veia marginal da orelha, raspe a superfície posterior da orelha do coelho. Use um lenço umedecido com etanol a 70% para desinfetar o local e dilatar a veia marginal da orelha. Isso é indicado pelo oval tracejado preto na Figura 1F.
2. Neste ponto, peça a um experimentador que cubra o rosto do coelho com a mão para diminuir o estresse do procedimento para o coelho. Um segundo experimentador canula cuidadosamente a veia marginal da orelha com um angiocateter estéril de 25 G.
3. Assim que o cateter estiver na veia, coloque um tampão de injeção estéril na extremidade do cateter para que uma agulha possa introduzir a medicação por via intravenosa. A localização do bujão de injeção é indicada por um círculo azul na Figura 1G.
4. Faça uma tala envolvendo gaze de 4 x 4 polegadas com fita adesiva para formar uma forma de tubo e colocando-a dentro da orelha do coelho. Em seguida, prenda a tala na orelha para que o cateter fique preso no lugar e permaneça na posição vertical, semelhante à orelha não cateterizada.
5. Injetar 1 mL de 10 unidades USP por mL de soro fisiológico heparinizado.
   nota: O cateter e o vaso devem estar visivelmente limpos de ar e permanecer pérvios. Se o cateter não estiver no vaso, a seringa não empurrará facilmente e haverá acúmulo de solução salina no tecido subcutâneo.
6. Administre doses incrementais de PTZ por via intravenosa de 1 mg/kg a 10 mg/kg em incrementos de 1 mg/kg a cada 10 min. Anote no início de cada dose para indicar qual animal está sendo injetado e a concentração do medicamento.
   nota: Isso permite avaliações dos efeitos agudos e aditivos da administração de PTZ. Alternativamente, para avaliar melhor os efeitos crônicos da baixa dose de PTZ, o coelho recebe doses repetidas em cada concentração de dose baixa, 7 doses a 2 mg / kg, 3 doses a 5 mg / kg e, em seguida, 3 doses a 10 mg / kg, cada dose é separada por 10 min.
7. Após cada dose, monitore cuidadosamente o vídeo-EEG-ECG-capnografia-oximetria para quaisquer anormalidades neurocardíacas elétricas e respiratórias e evidências visuais de atividade epileptiforme. Observe essas mudanças em tempo real e durante a pós-análise.
   nota: A atividade convulsiva geralmente começa dentro de 60 s após a administração de PTZ.

Figura 1: Coelho conectado ao equipamento.(A) Localização dos eletrodos de ECG, o braço esquerdo é indicado por um ponto amarelo. O braço direito é indicado por um ponto branco. A perna esquerda é indicada por um ponto vermelho. O solo anterior à perna direita é indicado por um ponto verde. (B) Coelho em contenção com eletrodos de ECG e EEG conectados. (C) Coelho juvenil em um sistema de retenção com modificações apropriadas para acomodar um coelho menor, incluindo um reforço sob o coelho, espuma de pescoço e tubo de PVC cortado. (D) Coelho em contenção com localização de eletrodos de EEG. O frontal direito é indicado por um ponto laranja. O frontal esquerdo é indicado por um ponto vermelho. O occipital direito é indicado por um ponto amarelo. O occipital esquerdo é indicado por um ponto azul. A referência é indicada por um ponto preto. (E) Coelho em contenção com estimulador fótico e configuração de cabine de espelho. A fonte de luz é indicada por um ponto branco. (F) Veia marginal da orelha após a orelha do coelho ter sido raspada e limpa com álcool. (G) Coelho com angiocateter firmemente colado na veia marginal esquerda da orelha. O local do obturador de injeção é indicado com um ponto azul. (H) Coelho com máscara facial presa ao tubo de capnografia por uma peça em T que contém uma válvula unidirecional. (I) Diagrama da máscara facial e da peça em T conectada ao tubo de capnografia. Durante a inspiração, o ar ambiente pode entrar na peça em T através de uma válvula unidirecional (seta verde). Durante a expiração, o CO2 sai da peça em T entrando na tubulação de capnografia (seta amarela). Devido à pequena quantidade de espaço morto, muito pouco CO2 é retido na peça em T e geralmente é inferior a 5 mmHg.