Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Para permitir que os coelhos se aclimatem nas contenções e para que o investigador confirme objetivamente a estabilização das frequências cardiorrespiratórias, instrumente todos os coelhos com os sensores cardiorrespiratórios e neuronais e realize monitoramento contínuo por vídeo por > 1 hora, 1 a 3 vezes por animal.
2. Experimento de medicação intravenosa (Pentilenotetrazol, PTZ)
- Para visualizar a veia marginal da orelha, raspe a superfície posterior da orelha do coelho. Use um lenço umedecido com etanol a 70% para desinfetar o local e dilatar a veia marginal da orelha. Isso é indicado pelo oval tracejado preto na Figura 1F.
- Neste ponto, peça a um experimentador que cubra o rosto do coelho com a mão para diminuir o estresse do procedimento para o coelho. Um segundo experimentador canula cuidadosamente a veia marginal da orelha com um angiocateter estéril de 25 G.
- Assim que o cateter estiver na veia, coloque um tampão de injeção estéril na extremidade do cateter para que uma agulha possa introduzir a medicação por via intravenosa. A localização do bujão de injeção é indicada por um círculo azul na Figura 1G.
- Faça uma tala envolvendo gaze de 4 x 4 polegadas com fita adesiva para formar uma forma de tubo e colocando-a dentro da orelha do coelho. Em seguida, prenda a tala na orelha para que o cateter fique preso no lugar e permaneça na posição vertical, semelhante à orelha não cateterizada.
- Injetar 1 mL de 10 unidades USP por mL de soro fisiológico heparinizado.
nota: O cateter e o vaso devem estar visivelmente limpos de ar e permanecer pérvios. Se o cateter não estiver no vaso, a seringa não empurrará facilmente e haverá acúmulo de solução salina no tecido subcutâneo.
- Administre doses incrementais de PTZ por via intravenosa de 1 mg/kg a 10 mg/kg em incrementos de 1 mg/kg a cada 10 min. Anote no início de cada dose para indicar qual animal está sendo injetado e a concentração do medicamento.
nota: Isso permite avaliações dos efeitos agudos e aditivos da administração de PTZ. Alternativamente, para avaliar melhor os efeitos crônicos da baixa dose de PTZ, o coelho recebe doses repetidas em cada concentração de dose baixa, 7 doses a 2 mg / kg, 3 doses a 5 mg / kg e, em seguida, 3 doses a 10 mg / kg, cada dose é separada por 10 min.
- Após cada dose, monitore cuidadosamente o vídeo-EEG-ECG-capnografia-oximetria para quaisquer anormalidades neurocardíacas elétricas e respiratórias e evidências visuais de atividade epileptiforme. Observe essas mudanças em tempo real e durante a pós-análise.
nota: A atividade convulsiva geralmente começa dentro de 60 s após a administração de PTZ.
