Isolamento do botão corneoescleral: um procedimento cirúrgico para obter o botão corneoescleral do olho suíno

Resumo

Fonte: Okurowska, K., et al. Estabelecendo um modelo de córnea ex vivo suína para estudar tratamentos medicamentosos contra ceratite bacteriana. J. Vis. Exp. (2020).

Neste vídeo, mostramos um procedimento para isolar cirurgicamente o botão corneoescleral para gerar um modelo de córnea suína ex vivo. O modelo é útil para estudos histológicos, patológicos e farmacológicos devido à sua semelhança com o olho humano.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Esterilização

1. PASSO CRÍTICO: Desinfete todas as pinças e tesouras mergulhando por 1 h em solução a 5% (v/v) de Distel em água destilada, limpe com uma escova, enxágue com água da torneira e esterilize em forno a 185 °C por um mínimo de 2 h.
2. Esterilize todos os outros artigos de vidro e reagentes em autoclave a 121 °C durante 15 minutos ou prepare os reagentes de acordo com as instruções do fabricante. Execute os seguintes procedimentos em uma cabine de segurança microbiológica classe II.

2. Coleta de amostra

1. Coleção de olhos suínos
   1. Grandes porcas brancas, um cruzamento com um javali de Hampshire foi usado. Os animais foram atordoados com uma corrente elétrica e os olhos foram enucleados 2 h depois no abatedouro.
   2. ETAPA CRÍTICA: Uma vez enucleados, transfira os olhos para o laboratório em uma solução salina tamponada com fosfato estéril (PBS) para evitar que sequem e processe-os imediatamente após a chegada.

3. Preparação do botão corneoescleral

1. Use uma pinça estéril para segurar o tecido ao redor do globo ocular e transfira-o para uma placa de Petri. Remova a conjuntiva e o tecido muscular ao redor do globo ocular em uma placa de Petri usando a lâmina de bisturi nº 15 e uma pinça.
2. Levante suavemente o globo ocular enquanto segura o nervo óptico com uma pinça e transfira para um frasco de 0,5 L cheio de PBS estéril.
3. Assim que todos os olhos estiverem limpos do tecido circundante, mova-os usando uma pinça estéril para outro frasco de 0,5 L cheio de iodopovidona a 3% (v/v) em PBS e deixe por 1 min.
4. Transfira os globos oculares para outro frasco de 0,5 L com PBS estéril.
5. Use uma pinça para manter o olho imóvel em uma placa de Petri e faça um corte próximo à córnea com uma lâmina de bisturi nº 10A.
6. PASSO CRÍTICO: Segure a borda do corte e use uma tesoura para extirpar a córnea, deixando cerca de 3 mm de esclera ao redor da córnea. Certifique-se de que a ponta afiada da tesoura não perfure a íris ou o tecido coróide e esteja no espaço supracoroidal.
7. Segure o botão corneoescleral com uma pinça e use outro par de pinças pontiagudas para separar suavemente o tecido uveal.
8. Levante o botão corneoescleral do globo restante e enxágue-o brevemente em solução de iodopovidona a 1,5% (v / v) em PBS em uma placa de 12 poços.
9. Coloque o botão corneoescleral em outra placa de 12 poços cheia de PBS estéril.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Placa de 12 poços Cellstar	Greiner Bio-One	Nº 665180
Distel	Fisher Científico	12899357
fórceps	Fisher Científico	15307805
Pbs	Sls	Pág. 4417
Placa de Petri	Fisher Científico	12664785
Iodopovidona	Farmácia Weldricks	2122828
Lâmina de bisturi número 15	Fisher Científico	O305
Bisturi Swann Morton	Fisher Científico	11849002