Extração de tecido bronquiolar de porco: um procedimento para dissecar seções de tecido bronquiolar de pulmões suínos

Resumo

Fonte: Harrington, N. E. et al. Teste de eficácia de antibióticos em um modelo ex vivo de biofilmes de Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus no pulmão de fibrose cística. J. Vis. Exp. (2021)

Neste vídeo, descrevemos um procedimento cirúrgico para extrair tecidos bronquiolares de um pulmão de porco colhido. O tecido bronquiolar ex vivo pode ser usado para desenvolver modelos de infecção para o estudo de infecções pulmonares crônicas.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Dissecção de tecido pulmonar de porco ex vivo (EVPL)

1. Obtenha os pulmões da fonte designada o mais rápido possível após o abate, garantindo que sejam mantidos frios transportando-os para o laboratório em uma caixa térmica doméstica.
   nota: Os pulmões mais próximos do dia do abate apresentam menos hematomas devido ao armazenamento, mas o tecido mantido em armazenamento refrigerado por até 4 dias após o abate também pode ser usado. Como a caixa térmica precisa ser levada para o açougue ou matadouro, ela deve ser descontaminada seguindo as diretrizes do laboratório local após cada uso e armazenada fora do laboratório de microbiologia quando não estiver em uso, para reduzir o risco de contaminação e quebra de contenção.
2. Trabalhando em uma superfície esterilizada e sob uma chama, coloque os pulmões em uma tábua de cortar de plástico limpa coberta com papel alumínio autoclavado. Verifique se os bronquíolos permanecem intactos. Se houver algum dano no matadouro ou durante o transporte, os pulmões não são adequados para uso.
3. Aqueça uma espátula sob uma chama e toque brevemente a faca na área do pulmão ao redor do bronquíolo para esterilizar a superfície do tecido.
4. Corte o tecido superficial ao redor do bronquíolo usando uma lâmina de barbear estéril. Faça incisões paralelas ao bronquíolo para evitar qualquer dano.
5. Uma vez que o bronquíolo tenha sido exposto, faça uma incisão transversal através do bronquíolo no ponto mais alto visível para liberar o bronquíolo.
6. Usando uma pinça estéril, segure levemente a extremidade livre do bronquíolo e corte qualquer tecido indesejado restante usando uma lâmina de barbear estéril. Faça uma incisão transversal final no bronquíolo antes que qualquer ramificação seja visível para remover o bronquíolo dos pulmões.
7. Coloque o bronquíolo na primeira lavagem DMEM/RPMI 1640. Deixe o bronquíolo na lavagem e repita as etapas 1.2-1.5 para colher seções adicionais de bronquíolo do mesmo pulmão, conforme necessário para produzir seções de tecido suficientes.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Etanol a 70% ou similar para esterilização de superfície e equipamento de dissecação de flamina gof
Folha de alumínio - pré-esterilizada por autoclave - para cobrir a tábua de cortar na qual você dissecará os pulmões
bico de Bunsen
Tábua de cortar - recomendamos uma tábua de plástico para permitir uma fácil descontaminação com álcool.
Caixa térmica para transportar pulmões para o laboratório
Tesouras de dissecção em diferentes tamanhos
Meio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM)
Tubos reforçados de 2 mL da marca Fisher	Thermo Fisher	15545809
Faca de palete grande
Lâminas de barbear montadas
Tábua de cortar de plástico e folha de alumínio para criar uma superfície de dissecação estéril e lavável
Instituto Memorial de Roswell Park (RPMI) 1640 médio
Seleção de pinças (pontas rombas recomendadas)
Recipientes adequados para descarte de perfurocortantes e tecidos suínos contaminados, de acordo com as políticas de saúde e segurança da sua instituição.