Modelo de biofilme de pulmão de porco ex vivo: uma técnica para desenvolver modelo de pulmão para estudar biofilmes bacterianos em tecido bronquiolar de porco

Resumo

Fonte: Harrington, N.E. et al., Teste de eficácia de antibióticos em um modelo ex vivo de biofilmes de Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus no pulmão de fibrose cística. J. Vis. Exp. (2021).

Este vídeo descreve o protocolo para o desenvolvimento de um modelo de biofilme bacteriano de biofilme bacteriano ex vivo em tecido bronquiolar infectado. Os biofilmes são agregados bacterianos embutidos em uma matriz aderente a uma superfície. Este modelo é usado para estudar a suscetibilidade a antibióticos de bactérias em diferentes estágios de formação de biofilme.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Dissecção e infecção de tecido pulmonar de porco ex vivo (EVPL)

1. Faça SCFM para uso com tecido EVPL, siga a receita para SCFM modificado de 1 L fornecida na Tabela 1.
2. Antes da dissecção, prepare uma(s) placa(s) de ágar da(s) cepa(s) bacteriana(s) necessária(s) para infecção usando qualquer ágar padrão no laboratório para P. aeruginosa/S. aureus (por exemplo, caldo de lisogenia + ágar 1,2%).
3. Calcule quantos pe....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Seringas de insulina - 0,5 mL com agulha 29G acoplada.	VWR	BDAM324892
Placas de cultura de 24 poços
Etanol 70% ou similar para esterilização de superfície e queima de equipamentos de dissecação
Placas de ágar para preparar estrias de P. aeruginosa / S. aureus (qualquer meio adequado)
agarose
Folha de alumínio - pré-esterilizada por autoclave - para cobrir a tábua de cortar na qual você dissecará os pulmões.
Membrana de vedação Breathe-easy ou Breathe-easier para placas multipoços	Biotecnologia diversificada	BEM-1 ou BERM-2000
bico de Bunsen
Tábua de cortar - recomendamos uma tábua de plástico para permitir uma fácil descontaminação com álcool.
Caixa térmica para transportar pulmões para o laboratório
Tesouras de dissecção em diferentes tamanhos
Meio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM)
Faca de palete grande
Lâminas de barbear montadas
Placas de Petri
Tábua de cortar de plástico e folha de alumínio para criar uma superfície de dissecação estéril e lavável
Instituto Memorial de Roswell Park (RPMI) 1640 médio
SCFM			Ingredientes listados na Tabela 1
Seleção de pinças (pontas rombas recomendadas)
Recipientes adequados para descarte de perfurocortantes e tecido pulmonar de suínos contaminados, de acordo com o da sua instituição políticas de saúde e segurança.