Remoção da membrana nictitante: um procedimento cirúrgico para remover a membrana nictitante do olho de coelho

Resumo

Fonte: Honkanen, R. A., et al. Estabelecimento de um modelo de olho seco grave usando dacrioadenectomia completa em coelhos. J. Vis. Exp. (2020).

Neste vídeo, demonstramos um procedimento cirúrgico para remover a membrana nictitante do olho do coelho.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Remoção da membrana nictitante

NOTA: Para simplificar, a técnica para o olho direito é descrita abaixo. Conclua este procedimento no olho esquerdo de maneira idêntica. Remova a membrana nictitante bilateralmente durante o período de aclimatação (geralmente na primeira semana).

1. Coloque o coelho em um saco de contenção de tamanho apropriado.
2. Administre uma injeção subcutânea de acepromazina (1 mg/kg) sobre os ombros usando uma seringa de 1 cc e agulha 26 G para sedar o coelho. O ponto final para essa sedação leve é quando o animal mantém uma posição relaxada da cabeça sem movimentos normais de varredura e suas orelhas não estão mais totalmente eretas.
3. Usando uma micropipeta, aplique 25 μL de lidocaína sem conservantes (1%) no olho. Insira um espéculo de tampa de arame entre as pálpebras.
4. Segure a membrana nictitante em seu ápice com 0,3 pinça (ou equivalente) e puxe-a sobre a superfície da córnea. Injetar lidocaína a 1% com epinefrina 1:100.000 no espaço subconjuntival da membrana nictitante usando uma agulha 26 G. Injete aproximadamente 0,3 mL para formar uma bolha de tamanho modesto sobre a membrana nictitante. Volumes de injeção acima de 1 mL estão dentro de uma faixa de dose segura para coelhos (2-4 mg / kg).
5. Remova o espéculo de arame. Aguarde aproximadamente 5 minutos para que a lidocaína e a epinefrina façam efeito. Durante esse tempo, execute o mesmo procedimento no outro olho.
6. Recoloque o espéculo da tampa de arame. Segure e estenda a membrana nictitante sobre a superfície da córnea usando uma pinça de 0,3. Corte a membrana em sua base com tesoura de tenotomia ou equivalente.
   nota: O sangramento geralmente é mínimo, mas mantenha uma unidade de cautério de bateria de alta temperatura por perto e use conforme necessário para minimizar o sangramento. A pressão direta sobre a base cortada da membrana nictitante também pode ser usada para interromper pequenos sangramentos, se ocorrer.
7. Remova o espéculo da tampa de arame. Coloque pomada antibiótica tópica (neomicina, polimixina, bacitracina e hidrocortisona) sobre a superfície da córnea.
8. Execute um procedimento idêntico ao outro olho, conforme indicado pelo protocolo.
9. Coloque os animais de volta em gaiolas individuais e deixe cicatrizar por pelo menos uma semana, ou até que a superfície conjuntival esteja completamente cicatrizada do ponto de vista clínico, antes de realizar quaisquer outros ensaios ou intervenções.
   nota: A cura clínica completa é indicada pela ausência de inchaço, injeção ou secreção das superfícies conjuntivais. Os animais devem manter os olhos abertos normalmente, sem a presença de ptose protetora.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
acepromazina, Aceproinj	Henry Schein Saúde Animal, Dublin, OH	NDC11695-0079-8	0,1 ml/kg injeção subcutânea para sedação de coelho
saco de contenção de animais	Henry Schein Saúde Animal, Dublin, OH	Jorvet J0170	Use uma bolsa de tamanho apropriado.
unidade de cautério, para altas temperaturas, a bateria	Medline Industries Inc, Northfield, IL	REF ESCT001	Manter à mão em caso de sangramento, protocolo 2.7
fórceps, 0,3	Bausch e Lomb (Storz), Bridgewater, NJ	ET6319	Para remoção da membrana nictante, protocolo 2.5
espéculo de tampa, arame	Bausch e Lomb (Storz), Bridgewater, NJ	Barraquer SUH01	Para remoção da membrana nictante, protocolo 2.4
lidocaína 2% com epinefrina 1:100.000; mistura 50:50	Hospira Inc, Lake Forest IL	NDC 0409-3182-02	Pré-tratamento antes da remoção das membranas nictantes, protocolo 2.4
lidocaína, sem conservantes	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	L5647	1% em PBS para agente anestésico, para aplicação no olho, protocolo 2.4
micropipeta	Eppendorf	Pesquisa Plus 100 uL	Para aplicação de lidocaína sem conservantes no olho, protocolo 2.4
Ponteiras de micropipeta	Produtos médicos mundiais	41071052	Para aplicação de lidocaína sem conservantes no olho, protocolo 2.4
de agulha, calibre 26	BD, Lagos Franklin, NJ	REF 305115	Para injeção de lidocaína / epinefrina, protocolo 2.3 e 2.5
coelho, Nova Zelândia Branco	Charles River Labs, Waltham, MA (NZW)	2-3 kg	Animais de pesquisa
tesoura, tenotomia Westcott	McKesson Médico-Cirúrgico, São Francisco, CA	Miltex 18-1480	Para remoção da membrana nictante, protocolo 2.7
seringa, 1 cc	BD, Lagos Franklin, NJ	ref 309659	Para injeção de lidocaína / epinefrina, protocolo 2.3 e 2.5