Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Preparação de animais
NOTA: As porções do sistema da glândula lacrimal orbital são injetadas.
- Sedar os coelhos com acepromazina 0,2 mg/kg por via subcutânea.
- Corte o pelo na área periorbital e do couro cabeludo e remova completamente qualquer pelo residual usando Nair. Deixe a pele totalmente lisa para melhor visualização das características anatômicas e injeção de concanavalina A guiada por US (Figura 1).
- Induza sedação moderada conforme descrito acima.
2. Injeção da glândula lacrimal orbito-superior (OSLG)
NOTA: O OSLG segue em rápida sucessão.
- Aplique pressão medial no globo, fazendo com que o OSLG se projete da incisura posterior. Aplique pressão medial no globo ocular (Figura 2, seta vermelha) com a protuberância do OSLG a partir da incisura posterior. A protuberância serve como localização macroscópica para encontrar a incisura posterior.
- Use uma pinça curva com as pontas fechadas para recuar a área até que a abertura óssea no crânio seja sentida. Isso será semelhante a uma fenda com uma direção anterior / posterior sob a protuberância.
- Aplique uma pressão modesta com uma pinça para deixar um recuo na pele, que servirá como ponto de referência para a colocação da agulha (Figura 3A).
- Insira uma agulha (seringa de tuberculina com uma agulha de calibre 27 de 5/8 de polegada) perpendicular à pele sobre a marca de recuo (Figura 3B) ~ 1/4 de polegada na incisura e, em seguida, redirecione a agulha posterior e externamente em direção ao canto lateral, apontando para o ponto médio entre o local da injeção e a borda orbital óssea.
nota: Se a incisura não for precisamente direcionada com a agulha, o crânio bloqueia seu avanço.
- Assim que o cubo da agulha for alcançado, injete lentamente 1000 μg de Con A em um volume de 0,2 mL ( Figura 3C ).
- Complete a injeção do PSLG e OSLG dentro de 2-3 min
- Remova o animal da sedação com isoflurano (se ainda não tiver feito). A injeção da glândula lacrimal inferior (ILG) geralmente pode ser concluída sem sedação adicional.
