Modelo Gerador de Carcinoma Hepático de Coelho: Um Procedimento Cirúrgico para Implantar Tecido Tumoral no Lobo Esquerdo do Fígado para Indução de Carcinoma Hepatocelular

Resumo

Fonte: Khabbaz, R. C. et al. Desenvolvimento e uso angiográfico do modelo Rabbit VX2 para câncer de fígado. J. Vis. Exp. (2019)

Neste vídeo, demonstramos a implantação cirúrgica de tecido tumoral em um fígado de coelho para induzir carcinoma hepatocelular. O procedimento ajuda a estabelecer um modelo animal confiável para estudar o comportamento do tumor e o desenvolvimento de tratamentos locorregionais direcionados ao câncer de fígado.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Implante de tumor hepático por laparotomia

1. Prepare o coelho receptor para laparotomia. Anestesiar o coelho receptor usando 45 mg/kg de cetamina e 5 mg/kg de xilazina para indução, seguido de intubação e manutenção com 1% a 3% de isoflurano, conforme necessário. Quando o coelho estiver anestesiado, raspe o local da cirurgia usando uma máquina de cortar cabelo. Limpe a área da incisão usando lavagem triplicata com esfoliante betadina, solução de etanol a 70% e solução de betadina e cubra o abdômen de forma cirúrgica estéril.
2. Usando uma lâmina # 15, inicie a laparotomia fazendo uma pequena incisão na linha média vertical para baixo através da pele do coelho a partir do processo xifóide. Isso deve ser facilmente palpado e tende a ser aproximadamente do tamanho de um centavo americano. Veja a Figura 1.
3. Reflita a pele e identifique a linha alba. Deve ser uma faixa branca reflexiva de tecido viajando inferiormente na linha média. Use dissecção romba para atravessar a linha alba e expor o peritônio. Veja a Figura 2.
   nota: O peritônio é facilmente identificado, pois estará diretamente sobreposto ao intestino, que pode ser visto se movendo com a respiração.
   cuidado: O peritônio tende a ser aderente ao intestino subjacente devido à tensão superficial. O uso de trauma contuso para dissecar a linha alba ajuda a dissipar o risco de perfurar o intestino subjacente.
4. Uma vez que o peritônio esteja exposto, disseque-o cuidadosamente para entrar na cavidade peritoneal. O fígado agora pode ser identificado. Para navegar melhor no espaço abdominal, estenda a incisão da linha média 1 a 22 cm inferiormente através da pele, músculo e peritônio.
   nota: A extensão da incisão na linha média pode ser feita de forma fácil e segura, inserindo cuidadosamente um hemostático curvo no espaço peritoneal com a ponta curva voltada superficialmente para o peritônio. Em seguida, abra ligeiramente o hemostático e use uma lâmina para perfurar o tecido entre os dois braços do hemostático.
5. Identifique o lobo esquerdo do fígado para selecionar um local para implantação do tumor. O lobo esquerdo é ínfero-lateral ao lobo medial que fica na linha média.
6. Antes de tentar retirar o fígado do espaço peritoneal, coloque um pedaço de gaze seco na face inferior da incisão.
   nota: A gaze fornecerá uma superfície aderente para colocar o fígado para evitar que ele se retraia de volta para o abdômen.
7. Usando uma pinça atraumática ou um pedaço de gaze úmida sobre os dedos, retire cuidadosamente o lobo esquerdo do fígado do abdômen através da incisão e coloque-o sobre a gaze seca colocada anteriormente. Veja a Figura 3.
   cuidado: A cápsula hepática é sensível e pode se romper facilmente. É fundamental ser gentil ao manusear esse órgão para evitar sangramento capsular, hematomas no fígado e/ou eventual hemoperitônio.
   nota: Normalmente, o fígado se declarará visualmente ao entrar no espaço peritoneal; no entanto, se o estômago do coelho estiver distendido, o fígado pode ser empurrado cranialmente para fora da vista. Se for esse o caso, levante suavemente a parede abdominal usando uma sonda romba. Nesse cenário, o fígado tende a aderir ao aspecto ventral do diafragma devido à tensão superficial, portanto, separe cuidadosamente o fígado usando uma sonda romba e ele deve se desprender. Em seguida, use uma pinça atraumática para retirar o fígado.
8. Neste ponto, prepare o tecido tumoral para implantação e coloque um pedaço de gaze úmida sobre o fígado para protegê-lo.
9. Selecione uma peça de tecido tumoral pré-processado de 1\u20122 mm³ para implantação no fígado. Veja a Figura 4.
10. Usando uma lâmina # 11, perfure o tecido hepático em um ângulo de 45 ° fazendo uma bolsa de 0,5 cm de profundidade, tomando cuidado para não penetrar no aspecto dorsal da cápsula hepática. Deixe a lâmina no lugar depois de fazer o furo. Veja a Figura 5.
11. Levante suavemente a lâmina na direção ventral para criar uma pequena bolsa no leito do fígado. Pegue o pedaço do tumor usando uma pinça, coloque o pedaço do tumor neste bolso e remova a lâmina.
    nota: A lâmina pode ser removida antes da inserção da peça tumoral, no entanto, o fígado sangrará e isso pode obscurecer o local da punção, dificultando a identificação.
    cuidado: Certifique-se de minimizar o contato do tumor com quaisquer outras estruturas para evitar a disseminação não intencional do tumor. Isso também pode ser evitado deixando de lado quaisquer ferramentas usadas para auxiliar na implantação posterior.
12. Neste ponto, coloque um pedaço de agente hemostático, como espuma de gel, sobre a bolsa tumoral para promover a hemostasia e evitar a ejeção do pedaço tumoral.
13. Retorne o fígado ao abdômen, uma vez confirmada a hemostasia.
14. Feche a parede abdominal com sutura de polidioxanona 3-0 em agulha cônica com ponto contínuo simples e feche a pele com pontos de poliglactina 910 4-0 em agulha cortante com ponto subcuticular contínuo.
    cuidado: Ao fechar a parede abdominal, tome cuidado para não danificar o omento ou outras estruturas intestinais em um lançamento de sutura.

Resultados

Figura 1: Processo xifóide exposto. A pele e o músculo subjacente foram refletidos para permitir a visualização do processo xifóide (seta preta) e do intestino (seta branca). A estrela branca denota a direção craniana.

Figura 2: Linea alba. A pele e a ...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Máquina de cortar cabelo	Wahl	Rolamento 41870-0438
Cetamina	Henry Schein	Rolamento 56344
xilazina	Akorn	Rolamento 59399-110-20
Hemostático curvo	WPI	501288
Fórceps atraumático	Sklar	Telefone: 52-5077
gaze	Medline	NON21430LF
15 lâminas	Steris	02-050-015
11 lâminas	Steris	02-050-011
Surgicel	Ética	Ano 1951
3-0 PDS/Conicidade	Ética	Z305H
4-0 Vicryl/Corte	Ética	J392H