Coleta de cartilagem articular de articulações de um doador equino: um procedimento cirúrgico para isolar o tecido conjuntivo vascular de articulações cadavéricas de um doador equino

Neste artigo

Resumo

Fonte: Benders, K. E. M. et al. Fabricação de Andaimes de Matriz Derivada de Cartilagem Descelularizada. J. Vis. Exp. (2019)

Neste vídeo, demonstramos a extração da cartilagem articular de uma articulação cadavérica equina. A cartilagem articular isolada pode ser usada para análise posterior a jusante.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE

1. Coleta de cartilagem articular de articulações de doadores (cadáveres)

Antes da etapa de colheita, prepare 1 L de solução de lavagem da cartilagem, consistindo de solução salina estéril tamponada com fosfato (PBS), suplementada com 100 U/mL de penicilina, 100 μg/mL de estreptomicina e 1% (v/v) de anfotericina B.
Use luvas e jaleco durante todo o procedimento de colheita, pois o doador pode ser portador de patógenos.
Obtenha uma articulação intacta (cadavérica) para isolamento da cartilagem.
nota: Neste ponto, a pele ao redor da articulação ainda está intacta. A cartilagem do joelho equino obtida de equinos foi utilizada neste protocolo, mas outras articulações de outras espécies também podem ser utilizadas.
Remova a pele localizada ao redor da área de interesse da articulação usando um bisturi e uma pinça cirúrgica. Além disso, remova o excesso de gordura e tecido muscular, se necessário, sem danificar a articulação subjacente. Opcionalmente, transfira o cadáver preparado para uma cabine de segurança biológica.
Para realizar uma artrotomia, ou seja, uma separação da articulação, primeiro defina o local onde a articulação se articula, realizando a extensão e flexão da articulação.
Remova cuidadosamente mais camadas de gordura, músculos e tendões com um bisturi e uma pinça cirúrgica para abrir a área da articulação.
Faça uma incisão para alcançar a cavidade articular.
nota: A cavidade articular é preenchida com líquido sinovial, que pode pingar da cavidade ao realizar uma incisão correta.
Continue a abrir a articulação completamente, cortando os tendões que mantêm a articulação unida.
Inspecione a cartilagem em busca de danos macroscópicos.
NOTA: Se a cartilagem articular não tiver uma aparência brilhante e lisa ou se houver bolhas, fendas ou defeitos evidentes, descarte a cartilagem.
Use um bisturi estéril para remover a cartilagem do osso subcondral. Corte até o osso subcondral para remover também a zona profunda da cartilagem (Figura 1). Para evitar que a cartilagem seque, pingue regularmente a solução de lavagem da cartilagem na cartilagem.
nota: Neste momento, o tamanho das fatias de cartilagem não importa.
Colete as fatias de cartilagem em tubos de 50 mL contendo solução de lavagem de cartilagem previamente preparada (Figura 2A).
Depois de coletar a cartilagem de todas as áreas de interesse, congele as fatias de cartilagem em nitrogênio líquido por 5 min.
Transfira as fatias de cartilagem para tubos de 50 mL e liofilize imediatamente as fatias de cartilagem por 24 h em um liofilizador. Defina o liofilizador em aproximadamente 0.090 mbar enquanto o condensador de gelo está a -51 °C (Figura 2B).
Armazene as fatias de cartilagem em local seco e à temperatura ambiente até uso posterior.

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Resultados

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Figura 1: Joelho equino após remoção da cartilagem de espessura total. A cartilagem é removida dos côndilos usando um bisturi até que a camada de cartilagem calcificada que não pode ser cortada com um bisturi seja alcançada.

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Figura 2: ...