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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Chegada e aclimatação de animais
- Quarentena de leitões de 1 a 2 dias por pelo menos 24 horas após a chegada.
- Leitões domésticos em gaiolas de aço inoxidável limpas e higienizadas (36 pol x 48 pol x 36 pol) em cama de lascas de álamo tremedor e ração ad libitum com substituto do leite de porco.
- Mantenha a temperatura ambiente em 85 ° F para garantir um ambiente termoneutro.
2. Dia do Experimento
- Remova a alimentação 2 h antes do experimento.
- Injete os leitões com uma injeção intramuscular de cetamina (10–40 mg/kg)/xilazina (1,5–3,0 mg/kg IM) e transporte através de uma gaiola de transporte para o espaço cirúrgico.
3. Indução e Manutenção da Anestesia
- Administrar anestésico inalatório de isoflurano a 4% misturado em oxigênio pelo cone nasal e confirmar que o animal está profundamente anestesiado, avaliando a ausência de reflexos palpebral e de retirada.
- Intubar o animal colocando-o em decúbito dorsal e usar um laringoscópio (lâmina reta) para ajudar a guiar o tubo de intubação (diâmetro 2,5–2 mm) para dentro da traqueia.
- Coloque o animal no ventilador assim que o tubo de intubação estiver seguro.
- Certifique-se de que os leitões recebam uma mistura de isoflurano (manutenção de 0,25% a 3%), oxigênio e óxido nitroso.
- Forneça uma dose de fentanil (10 μg / kg) e continue administrando uma dose a cada 1-2 h para garantir a profundidade adequada contínua de analgesia e sedação e para evitar artefatos de movimento que possam arriscar o deslocamento do tubo endotraqueal.
- Estabeleça o acesso intravenoso (IV) na veia abdominal subcutânea ou em qualquer outra veia periférica.
- Estabeleça a linha arterial através da artéria femoral. Isso pode ser feito de forma não invasiva ou realizando um corte.
4. Cirurgia do Plexo Braquial
- Colocar o animal em decúbito dorsal na mesa cirúrgica após anestesia adequada, conforme descrito na seção 3, com o membro superior em abdução, expondo a região axilar.
- Use qualquer campo cirúrgico para cobrir o animal. Use técnicas limpas, mas não estéreis.
- Exponha o complexo do plexo braquial em ambos os lados da coluna vertebral fazendo uma incisão na linha média (usando uma lâmina # 10) sobre a pele e a fáscia que cobre a traqueia, até o terço superior do esterno, correspondendo aos níveis da coluna entre C3 e T3.
- Extrapole a incisão usando a pinça e o hemostático horizontalmente de cada lado, desde a incisura supraesternal ao longo da borda da clavícula até o braço, poupando as veias cefálica e basílica.
- Liberação dos retalhos superior e inferior por dissecção romba com tesoura e pinça, permitindo o acesso às regiões cervical e torácica do plexo braquial, respectivamente.
- Identifique o eixo (C2) e a primeira costela no T1. Usando esses pontos de referência, identifique os três cervicais inferiores (C6–C8) e o primeiro forame vertebral espinhal torácico (T1) e, em seguida, examine o plexo cuidadosamente para localizar bifurcações das divisões (forma de M) para obter a exposição.
- Rotule (usando alças nervosas) as regiões do plexo braquial acima dessas bifurcações mais próximas da coluna como raiz / tronco e rotule aquelas abaixo dessas bifurcações como cordas seguidas pelo nervo, que estão localizadas mais perto do braço.