Isolamento da aorta suína: um procedimento cirúrgico para extirpar a aorta torácica de porcos em miniatura para análise a jusante

Neste artigo

Resumo

Fonte: Zhao, Y., et al. Isolamento e Cultura de Células Endoteliais Aórticas Primárias de Porcos Miniaturas J. Vis. Exp. (2019)

Neste vídeo, demonstramos um procedimento para a remoção cirúrgica da aorta de porcos em miniatura. As células endoteliais colhidas dessas aortas isoladas podem ser cultivadas em condições in vitro para estudar a coagulação e as respostas imunes.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Cirurgia e preparação para isolamento de células endoteliais da aorta suína

Desinfetar a sala de cirurgia com luz UV por 1 h e desinfetante médico 84 líquido (o teor de cloro disponível é de 4,0% - 5,0%, Tabela de Materiais) antes de realizar a cirurgia.
Depois que o porco em miniatura recebeu uma injeção intramuscular formada por 15 mg/kg de cetamina, 15 mg/kg de cloridrato de xilazina e 0,05 mg/kg de cloridrato de fenacetina (Volumes: 100μL/kg, Tabela de Materiais) (Figura 1A), confirme o estado anestésico do animal com a verificação do estímulo doloroso suíno (por exemplo, beliscar uma orelha ou sacudir um membro anterior) e índice fisiológico (por exemplo, pressão arterial, frequência cardíaca e respiratória).
nota: Outra injeção de meia dose pode ser administrada ao porco se ele mostrar sinais de acordar.
Corte o abdome com bisturi, exponha a veia cava inferior e, consequentemente, injete heparina sódica (5.000 U, Tabela de Materiais) na veia cava inferior com seringa de 5 mL.
Cinco minutos depois, insira um cateter na aorta abdominal para sangrar, corte a pele do tórax e incise o diafragma com bisturi e, posteriormente, corte o ventrículo esquerdo.
nota: Certifique-se de que o porco seja sacrificado verificando o pulso aórtico após sangrar e cortar o coração.
Extirpar as costelas com uma pinça de osso (Tabela de Materiais) e expor o coração e os pulmões. Encontre a aorta posterior ao coração e aos pulmões e aperte as duas extremidades. Lave a aorta uma vez com tampão de lavagem pré-resfriado - 1x solução PBS (pH 7,4) com 1% (v / v) de penicilina / estreptomicina. (Figura 1B, C).
Corte a aorta com uma tesoura e mantenha a aorta presa em cada extremidade. Extirpar o excesso de tecido ao redor da aorta com pinças e tesouras estéreis. Colocar a aorta em um tubo de centrífuga de 50 mL, lavar a aorta com tampão de lavagem pré-resfriado 3x (30 mL por lavagem) e transferir a aorta para o laboratório (Figura 1D).

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Resultados

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Figura 1: O procedimento cirúrgico e a excisão da aorta de um porco em miniatura. (A) Fotografia de um porco em miniatura (Bama). (B) A aorta é exposta após laparotomia e toracotomia. (C) A aorta é pinçada em cada extremidade. (D) A aorta é colocada em um tubo de 50 mL com tampão de lavagem a frio.