Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Preparação do coelho para a cirurgia
- Anestesiar o coelho usando 20-40 mg / kg de cetamina e 2 mg / kg de midazolam por meio de injeção subcutânea. Coloque o coelho em isoflurano a 1,5% a 3% (normalmente 2%) durante a sedação inicial usando uma máscara. Administre uma injeção de alfaxalona para manter a anestesia por meio de uma injeção intramuscular de 3 mg / kg.
- Uma vez anestesiado, remova a máscara e insira um tubo endotraqueal com balonete nas vias aéreas e conecte-o a um ventilador. Continue a administrar isoflurano a 1,5% a 3%.
- Colete sangue da artéria central de cada orelha para um painel químico de linha de base.
- Coloque um cateter de veia auricular 22 G na veia lateral da orelha para gotejamento da solução de Ringer com lactato durante todo o procedimento cirúrgico. Como alternativa, pode-se usar soro fisiológico (cloreto de sódio a 0.9%).
- Usando a veia lateral na orelha oposta, coloque um cateter na veia e administre alfaxalona a 6 mg / kg / h. Aumente gradualmente a alfaxalona para 8 mg / kg / h enquanto diminui o isoflurano para 0,6% durante o período de preparação.
- Para limitar a dor e o risco de infecção, administre buprenorfina (0,01 mg / kg) e enrofloxacina (5 mg / kg) usando uma injeção subcutânea com uma agulha de 25 G.
- Apare o cabelo no pescoço, coxas internas direita e esquerda e costas usando uma tesoura (lâmina # 40). O cabelo é removido da parte de trás para manter o contato com a almofada de aterramento.
- Coloque um manguito de pressão arterial em cada um dos membros posteriores e meça a pressão arterial inicial. Coloque o manguito logo abaixo do joelho com a sonda logo acima do jarrete na superfície lateral.
- Posicione o coelho na mesa de cirurgia de costas e esfregue e cubra os locais da cirurgia. Isso inclui o pescoço para acesso à artéria carótida e a parte interna da coxa direita para acesso à artéria femoral. Realize a esfoliação de esterilização com esfoliações alternadas de clorexidina a 2% e álcool etílico a 70%. Repita isso três vezes e, em seguida, aplique um spray final com solução de clorexidina a 2%.
- Coloque uma bola de aço inoxidável de 3 mm esterilizada dentro de uma bolsa de polietileno de baixa densidade em cima da perna direita (esfregada) perto da parte superior da coxa para servir como referência de tamanho durante as medições do angiograma. Coloque uma cortina estéril sobre a perna até o momento da cirurgia. Deixe a bola dentro do saco plástico estéril durante a primeira angiografia.
2. Angiografia
- Exponha a artéria carótida comum direita
- Faça uma incisão de 4 a 5 cm de comprimento logo lateral à traqueia usando um bisturi com uma lâmina # 15.
- Use dissecção romba para expor a artéria carótida e abra a incisão usando pequenos afastadores Weitlaner. Isole cuidadosamente a artéria carótida da veia jugular e do nervo vago. Normalmente, uma tesoura curva de Metzenbaum e um hemostático de mosquito curvo são usados para a dissecção romba. Certifique-se de obter a separação total da artéria carótida do nervo e da veia jugular para fazer com que as ligaduras liguem apenas a artéria.
- Coloque uma ligadura usando uma sutura de seda 4-0 nas extremidades proximal e distal da artéria exposta. Amarre a extremidade distal da carótida com um nó de cirurgião seguido por quatro nós quadrados. Na extremidade proximal, use um ligaloop para permitir que ele seja apertado ou afrouxado conforme necessário. O uso de um ligaloop colocado na extremidade proximal da artéria exposta pode ajudar a proteger o introdutor e o cateter.
- Administrar 500 UI de heparina por via intravenosa. Use aproximadamente 0,5 mL de lidocaína a 1% aplicada ao longo da carótida exposta para dilatar o vaso. Um tratamento geralmente é suficiente, mas pode ser repetido conforme necessário. Corte aproximadamente na metade da artéria carótida usando um bisturi ou tesoura de íris e, em seguida, coloque a ferramenta de inserção de fio de 4 polegadas na artéria.
- Alimente um fio-guia de 0,014 polegadas x 185 cm através da ferramenta de inserção até a bifurcação aórtica na crista ilíaca na aorta descendente. Remova a ferramenta de inserção e insira um cateter angiográfico pigtail 3F sobre o fio.
- Avance o cateter pigtail para 2 cm proximal à bifurcação aórtica na crista ilíaca na aorta descendente.
- Posicione a ponta do cateter entre a sétima vértebra lombar e a primeira vértebra sacral. Teste a localização do cateter injetando manualmente 2 a 4 mL de agente de contraste.
- Administre uma injeção intra-arterial de 100 μg de nitroglicerina através do cateter para aumentar a vasodilatação.
- Administre 0,8 mL de lidocaína a 1% ao coelho através do cateter para auxiliar na vasodilatação durante a angiografia. Conecte o tubo do injetor ao cateter e remova quaisquer bolhas de ar na linha. Injete 8-9 mL de meio de contraste usando injetor angiográfico automatizado através do cateter.
- Registre imagens seriadas dos membros posteriores usando angiografia.
- Defina o injetor de energia para injetar contraste em 3 mL/s para um total de 8-9 mL. Realize angiografia de subtração digital a 6 quadros por segundo.
- Selecione as imagens seriadas criadas e altere uma foto de cada angiografia usando aproximadamente -40% de configuração para minimizar a aparência do osso e capturar uma imagem completa da perfusão do vaso com contraste. Um exemplo de angiografia do fluxo vascular após ligadura/excisão da artéria femoral é mostrado na Figura 1.
