Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Anestesia e intubação
- Sedar os animais (coelhos brancos da Nova Zelândia (machos ou fêmeas) com três meses de idade, pesando ~ 2,5 kg cada) por injeção intramuscular (IM) de cetamina (25 mg / kg, 50 mg / mL, 0,5 mL / kg) + xilazina (3 mg / kg, 20 mg / mL, 0,15 mL / kg). Aguarde ~20 min para os animais dormirem
profundamente (atonia muscular completa).
nota: Esta pré-medicação permitirá um processo de intubação simples, rápido e indolor. Analgesia profunda e anestesia são induzidas conforme descrito na etapa 1.1.8.
- Coloque uma cânula intravenosa (IV) na veia marginal da orelha e mantenha-a fechada até que a intubação seja concluída.
nota: Esta linha IV servirá para perfundir fentanil e propofol para analgesia profunda e anestesia, respectivamente (ver etapa 1.8).
- Manter a anestesia fornecendo sevoflurano a 5% em oxigênio puro até que a intubação seja realizada.
nota: Esta etapa é necessária apenas se o animal apresentar sinais de despertar (movimentos oculares, contrações musculares).
- Anestesiar a traqueia localmente pulverizando lidocaína a 10%. Coloque o coelho em decúbito ventral e mantenha a cabeça em extensão vertical.
- Deslize o primeiro tubo endotraqueal de pequeno diâmetro (2.5 mm) na traqueia do coelho até que o fluxo de ar possa ser ouvido no tubo. Isso abrirá a laringe e facilitará a inserção do tubo definitivo.
- Insira uma guia (cateter de intubação) no tubo para fixar a posição do tubo na traqueia. Remova o tubo de pequeno diâmetro e deslize o tubo endotraqueal definitivo (4,9 mm) na guia.
- Remova a guia e encha o balão na extremidade do tubo endotraqueal para selar e bloquear o dispositivo na traqueia. O tubo permanecerá no lugar, mas pode ser preso usando um laço amarrado na testa. Ventile imediatamente (7 mL/kg, frequência de 40/min) o animal com sevoflurano a 3% em oxigênio puro.
- Perfundir continuamente (veia da orelha) fentanil (0,01 mg / mL, 2-4 mL / h) para induzir analgesia, 2-4 mg / kg de (2%) propofol (20 mg / mL, 4-8 mL / h) para induzir anestesia e 4 mL / kg / h de acetato de Ringer para manter as condições isovolumétricas.
- Coloque uma sonda de temperatura retal. Monitore também a função cardíaca, a temperatura e a saturação de oxigênio durante todo o processo.
- Controle a profundidade da anestesia monitorando a respiração autônoma; se o animal mostrar sinais de respiração autônoma, dispense um pequeno bolus de propofol e fentanil.
