Gerando um Modelo de Defeito Calvarial de Coelho: Um Procedimento Cirúrgico para Criar Defeitos Redondos na Parte Superior do Crânio de Coelho para Avaliar Materiais Substitutos Ósseos para Capacidades de Regeneração Óssea

Resumo

Fonte: Marger, L. et al., Modelo Calvarial de Aumento Ósseo em Coelho para Avaliação do Crescimento Ósseo e Neovascularização em Materiais de Substituição Óssea. J. Vis. Exp. (2019).

Neste vídeo, descrevemos o procedimento cirúrgico para gerar um modelo de calvária de coelho para avaliar as capacidades de regeneração óssea de materiais de substituição de amostras ósseas de interesse.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Cirurgia

1. Preparação do site
   1. Coloque o coelho em uma almofada aquecida (39 °C) coberta por um colchão (para evitar queimaduras) na mesa de cirurgia. Raspe o couro cabeludo.
   2. Aplique um gel lubrificante nos olhos para evitar irritação e ressecamento. Desinfetar o local esfregando a pele com iodopovidona (10%). Em seguida, cubra o coelho com uma cortina cirúrgica estéril e corte uma área de acesso para o crânio.
   3. Desinfetar o sítio cirúrgico com iodopovidona (10%) pela segunda vez. Aplique um gel lubrificante nos olhos para evitar irritação e ressecamento.
   4. Prepare uma mesa drapeada (campo estéril) para colocar a bandeja cirúrgica completa.
2. Abertura do sítio cirúrgico
   1. Anestesiar localmente com uma injeção subcutânea (SC) de lidocaína 2% (1 mL) no crânio.
   2. Incisar através da pele (com bisturi) ao longo da linha sagital da calvária, das órbitas até a protuberância occipital externa (~ 4 cm de comprimento). Certifique-se de que o periósteo esteja incisado.
   3. Eleve suavemente o periósteo (com um elevador periosteal) em ambos os lados da incisão. Enxágue o local com solução salina estéril.
3. Colocação do cilindro
   1. Localize as suturas mediana e coronal no crânio (Figura 2A, B). Observe que essas linhas anatômicas formam uma cruz. Os cilindros serão colocados em cada um dos quadrantes definidos pela cruz, garantindo que a borda do cilindro não fique sobre a sutura (Figura 2C).
   2. Coloque o primeiro cilindro no quadrante superior esquerdo (osso frontal esquerdo) e tente colocar o dispositivo na horizontal. Fixe na posição com forte pressão manual e aperte um microparafuso, até sentir resistência. Certifique-se de que a cabeça do parafuso esteja nivelada com a superfície da aba do cilindro.
   3. Repita o mesmo procedimento na outra aba para fixar o cilindro firmemente no crânio. Certifique-se de que o cilindro esteja hermeticamente fixado ao osso.
   4. Repita o procedimento no quarto superior direito (osso frontal direito), quarto inferior esquerdo (osso parietal esquerdo) e quarto inferior direito (osso parietal direito).
4. Perfuração óssea de 5 furos intramedulares dentro da área circunscrita pelos cilindros (Figura 1)
   1. Faça um orifício intramedular sob irrigação salina (0,8 mm de diâmetro, ~ 1 mm de profundidade) com uma broca redonda no osso, no centro da área circunscrita pelo cilindro. Certifique-se de que o sangramento apareça.
   2. Faça mais dois furos intramedulares ao longo do eixo que passa pelos dois parafusos da aba, nas bordas internas do cilindro. Ao longo do eixo perpendicular, faça mais dois orifícios intramedulares nas bordas internas do cilindro. Certifique-se de que o sangramento apareça.
   3. Repita a operação dentro dos outros três cilindros.
5. Enchimento de cilindros com amostras de material e tampas (Figura 3)
   1. Prepare o material substituto ósseo desejado de acordo com as instruções do fabricante ou especificações do material.
   2. Encha o primeiro cilindro até a borda com a amostra de material e feche o cilindro colocando a tampa. Repita o processo nos outros 3 cilindros.
6. Fechamento do sítio cirúrgico
   1. Feche a pele acima dos cilindros com uma sutura intermitente não reabsorvível.
   2. Aplique um curativo em spray na ferida.

2. Tratamento pós-cirúrgico

1. Interrompa o fornecimento de analgesia e anestesia (parada de propofol e perfusão de fentanil) e verifique a recuperação da respiração autônoma.
2. Pare a ventilação assim que o animal recuperar a respiração autônoma. Mantenha o animal sob oxigênio puro antes de acordar completamente.
3. Injete cloridrato de buprenorfina SC (0,02 mg / kg, 0,03 mg / mL, 0,67 mL / kg) e repita a injeção a cada 6 h por 3 dias como analgesia pós-cirúrgica.
4. Transfira o animal para seu alojamento habitual com água e alimentação completa.

Resultados

Figura 1: Especificações dos cilindros PEEK. Foram feitos dois furos (0,8 mm de diâmetro) nas abas estabilizadoras laterais para aparafusamento. As posições dos 5 orifícios intramedulares (0,8 mm de diâmetro) a serem perfurados no crânio dentro da área delimitada pelo cilindro são marcadas com círculos vermelhos.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Drogas
Fentanil	Bischel		Para analgesia
Ketalar 50mg/ml	Pfizer		Cetamina para anestesia
Lidohex	Bichsel		Gel lubrificante para os olhos
Opsite	Smith e sobrinho	66004978	Curativo pulverizável
Iodopovidona 10%, Betadine	Mundipharma		agente anti-infeccioso
Propofol 2%	Braun	3538710	Para anestesia
Rapidocaína 2%	Sintetica		Anestesia local
Rompun 2%	Bayer		Xilazina para anestesia
Sevoflurano 5%	Abbvie		Para anestesia
equipamento
Fresenius Vial piloto C	Imexmed		Bomba de infusão
Almofada aquecida	Aparelho de Harvard
Sucção dominante 50	Medela
Tubo de sucção Optimus	Promedical	80342.2
Motor cirúrgico	Schick dental	Qube	Perfuração de furos intramedulares
Ventilação	Maquet Servo1
material
Cilindros e tampas	Boutyplast	Personalizado	composição: PEEK (poli éter éter cetona)
Eixo auto-retentor manual	GlobalD	ACT1K
Alça móvel para eixo auto-retentor	GlobalD	Mtm
Parafusos autoperfurantes	GlobalD	VA1.2KL4	parafusos de acionamento cruzado compostos por titânio grau 5, ISO 5832-3
Bandeja cirúrgica
Tubo endotraqueal Shiley diâmetro 2,5mm	Covidien	Nº 86233	Para intubação
Tubo endotraqueal Shiley diâmetro 4,9mm	Covidien	107-35G	Para intubação
Ethicon prolene 4-0	Ehticon	8581H	Sutura não reabsorvível
fórceps	Marcel Blanc	BD027R	145 milímetros
Cateter de intubação	Cozinheiro médico		Guia para intubação
Brocas cirúrgicas redondas	Patterson	Rolamento 78000	0,8 mm de diâmetro, Perfuração de furos intramedulares
bisturi	Swann-Morton		n.º 10 e n.º 15
tesoura	Marcel Blanc	657	180 milímetros
Seringas Omnifix	Braun	Rolamento 4616057V	5ml, 10ml e 50ml
Venflon G22	Braun	Rolamento 42690985-01	Segurança Vasofix para a linha intravenosa da orelha