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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Preparação de Modelos de Infecção Óssea
- Manter coelhos brancos da Nova Zelândia machos, com 3 meses de idade, em gaiolas individuais, em condições controladas ao ar (20 ± 1 °C) e ciclos de iluminação claro-escuro de 12 h/12 h. Ofereça dieta de rotina e água da torneira diariamente.
- Certifique-se de que, no momento da cirurgia, o coelho pese mais de 3 kg.
- Anaestésico em coelhos por injeção intraperitoneal com pentobarbital sódico (3 mg por 100 g de peso corporal). Certifique-se de que os coelhos estejam totalmente anestesiados por uma falha em responder a um beliscão da pata. Fixe os coelhos na mesa de operação durante o procedimento de operação.
NOTA: Certifique-se de que a duração do procedimento de modelagem seja inferior a 1 h.
- Depile a região proximal da tíbia usando um barbeador elétrico na direção contrária ao crescimento do pelo. Desinfete a pele aplicando uma solução de iodopovidona.
- Marque a extremidade superior da tíbia e a posição do orifício de perfuração para injeção com S. aureus (a distância até a extremidade superior da tíbia é de 1,5 cm) com caneta e régua. Certifique-se de que as posições dos orifícios de perfuração estejam no meio do platô tibial horizontalmente (Figura 1A).
- Corte a pele da tíbia com bisturi nº 11 e faça uma incisão de 1 cm no periósteo (Figura 1B, C). Faça um furo de 2 mm de diâmetro na tíbia usando uma unidade elétrica de perfuração óssea (Figura 1D).
- Pressione os orifícios de 2 mm de diâmetro no planalto tibial com um cilindro de cera óssea de 2 mm de diâmetro e 2 mm de altura (Figura 1E). Remova a cera óssea sobressalente ao longo do plano horizontal do planalto tibial (Figura 1F). Verifique se o orifício de 2 mm está cheio de cera óssea (Figura 1G).
nota: Certifique-se de que os orifícios estejam cheios de cera óssea, verificando o orifício com ou sem transbordamento de sangue.
- Costure o periósteo e a pele com sutura cirúrgica absorvível em uma sutura vertical em colchão para evitar que o animal mastigue as suturas (Figura 1H).
- Injete 1 x 108 UFC/mL de soluções de S. aureus (30 μL por 100 g de peso corporal) com um injetor de assepsia de 1 mL (Figura 1I). Certifique-se de que as agulhas penetrem na cera óssea e injete a solução de S. aureus na medula óssea lentamente.
- Mantenha o animal em condições quentes e limpas para evitar a perda de calor após a modelagem. Monitore a frequência respiratória e a frequência cardíaca. Depois de acordar, alojar os coelhos em gaiolas individuais com livre acesso a comida e água.
