Descongelamento de embriões de coelho: um procedimento de aquecimento para recuperar embriões de coelho criopreservados para transferência de embriões

Resumo

Fonte: Garcia-Dominguez, X. et al., Transferência minimamente invasiva de embriões e vitrificação de embriões no estágio ideal de embrião em modelo de coelho. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra o procedimento para descongelar embriões de coelho vitrificados e as etapas de medição preventiva para a recuperação ideal do embrião.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Aquecimento de embriões

1. Descongele os embriões em uma única etapa.
   1. Colocar a ministra horizontalmente a 10 cm de vapor de azoto líquido durante 20-30 s.
   2. Quando o processo de cristalização começar dentro da ministra, mergulhe a ministraw em banho-maria a 25°C por 10-15 s.
   3. Remova o tampão de ministração e corte o tampão de algodão.
   4. Com um microdispensador acoplado, expulse todo o conteúdo do ministério para uma placa contendo solução de sacarose 0,33 M a 25°C em MO por 5 minutos.
      nota: Esta etapa deve ser feita rapidamente para reduzir a exposição do embrião à solução de vitrificação.
   5. Mova os embriões para uma nova placa contendo solução de BM por mais 5 min.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Nitrogênio líquido	Air Liquide	P1505XXX
Placas de Petri, 35 mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
Curativo de plástico (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
Canudo de plástico 0,25 mL	IMV - tecnologias	Nº 6431
tesoura	ROBOZ	RS-5880	Qualquer tesoura reta de aço de grau cirúrgico regular funcionará.
Luvas estéreis	Alvet Escartí	Rolamento 087GL010075
Bata estéril	Alvet Escartí	12261501
Máscara estéril	Alvet Escartí	058B15924B
Plugue de palha	IMV - tecnologias	Nº 6431
sacarose	Sigma Aldrich	S7903
Banho-maria	RAYPA	BAE-4
Solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS)	Sigma Aldrich	D5773	Sem cloreto de cálcio.