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1. O Método da Cápsula para Inativação em Biocontenção com Glutaraldeído a 2%, Seguido de Coloração Negativa em Laboratório BSL-2
- Procedimento de inativação de vírus.
- Dentro da BSC de biocontenção, misture bem a suspensão do vírus com o mesmo volume de glutaraldeído a 4% para atingir uma concentração final de glutaraldeído a 2%
cuidado: O glutaraldeído é um produto químico perigoso e requer proteção adequada. O glutaraldeído pode ser usado por breves períodos em um BSC normal, mas o reagente aberto estendido requer trabalho em um BSC canalizado ou capela de exaustão química.
- Inative os vírus com fixador por no mínimo 24 h antes de embalar, descontaminar e transferi-los para a instalação BSL-2 EM.
- Na instalação BSL-2 EM, aspire o vírus e a mistura fixadora para dentro da cápsula, contendo duas grades TEM, conectadas a uma pipeta.
- Coloque a pipeta horizontalmente por 10 min com as grades orientadas horizontalmente.
nota: Isso é para promover uma distribuição uniforme de partículas de vírus nas grades TEM.
- Pegue a pipeta e pressione o êmbolo para expelir o vírus para um recipiente de lixo. Aspire 40 μL de água dI para as cápsulas e expulse-a para o recipiente de resíduos por 3 ciclos de enxágue.
- Aspirar 40 μL de acetato de uranilo a 1% (UA) ou ácido fosfotúngstico de potássio (PTA) a 1% nas cápsulas por 30 s.
nota: O tempo de coloração variou de 10 s a 1 min com base na amostra do vírus.
cuidado: UA é um emissor alfa e uma toxina cumulativa. Manuseie-o com proteção adequada.
- Remova a cápsula da pipeta e seque as grades tocando a borda das grades em um pedaço de papel de filtro. Seque as grades ao ar e armazene-as para imagens MET subsequentes.