Coloração com azul de metileno para avaliar a formação de colônias metastáticas in vitro: um procedimento de coloração para avaliar a metástase quantificando células cancerígenas colhidas do modelo de camundongo cancerígeno

Resumo

Fonte: Nagai-Singer, M. A., et al. Usando análise de imagem baseada em computador para melhorar a quantificação de metástases pulmonares no modelo de câncer de mama 4T1. J. Vis. Exp. (2020)

Neste vídeo, descrevemos o procedimento de coloração com azul de metileno para quantificar a carga metastática contando colônias coradas obtidas pela cultura de células cancerígenas colhidas de órgãos distantes de um modelo de camundongo após a injeção.

Protocolo

Todos os procedimentos de modelo animal foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Processando tecidos

NOTA: Todas as etapas desta seção devem ser feitas usando a técnica estéril.

1. Rotule 1 tubo cônico de 15 mL por camundongo e adicione 2,5 mL de mistura de colagenase tipo IV e 30 unidades de elastase a cada tubo. Para fazer a mistura de colagenase tipo IV, dissolva 2 mg de colagenase tipo IV por mL 1x HBSS e filtro estéril. Isso pode ser armazenado por até 12 meses a -20 °C e descongelado qua....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
metanol	Fisher Científico	A412SK-4
Azul de metileno	Sigma-Aldrich	03978-250ML
RMPI-1640 Médio	ATCC	30-2001
Balancim ou roda giratória	qualquer	qualquer
Filtro descartável estéril com membrana PES	ThermoFisher Scientific	Rolamento 568-0010
Colagenase tipo IV	Sigma-Aldrich	C5138
Placas de cultura de tecidos de 3,5 cm	Nunclon	153066
Placas de cultura de tecidos de 10 cm	Fisher Científico	08-772-22
Tubo de centrífuga de 15 mL	Fisher Científico	14-959-70C
1X Solução Salina Balanceada de Hank (HBSS)	Thermo Científico	SH3026802
Tubo de centrífuga de 50 mL	Fisher Científico	14-959-49A
Filtro de células de 70 μM	Fisher Científico	22-363-548
70% de etanol	Sigma Aldrich	E7023	Diluir a 70% com água DI
incubadora			Precisa ser capaz de 5% de CO2 e 37 °C
fórceps	Roboz	RS-8100
centrifuga	qualquer	qualquer	Precisa ser capaz de 125 x g e 300 x g
água destilada	qualquer	qualquer
Elastásio	MP Biomédicos	100617