1. Coloração de Safranina O
<ol>
	<li>Comece com as lâminas de vidro contendo seções sagitais seriadas abrangendo uma região do centro do côndilo lateral até o centro do côndilo medial de um modelo de camundongo eutanasiado com o menisco medial desestabilizado.</li>
	<li>Em seguida, desparafinize as lâminas em oxileno e hidrate-as em um gradiente de etanol para água destilada. Em seguida, as lâminas são coradas com solução de hematoxilina de ferro Weigert, solução Fast Green (FCF) a 0,05%, solução de ácido acético a 1% e solução de Safranina O a 0,1%. Monte as lâminas usando meio resinoso.</li>
	<li>Pontue as lâminas coradas com Safranin O com base na perda de proteoglicano (cor vermelha) na cartilagem e na porcentagem de destruição na estrutura da cartilagem, faça a análise estatística para o escore histológico.</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

coloração safranin-o: um método para visualizar a integridade estrutural e a celularidade da cartilagem

Safranin-O Staining: A Method to Visualize the Structural Integrity and Cellularity of Cartilage

Fonte: Zhao, Y., et al. <a href="https://www.jove.com/v/50924">Estabelecimento de um modelo induzido cirurgicamente em camundongos para investigar o papel protetor da progranulina na osteoartrite.</a> J. Vis. Exp. (2014).
Neste vídeo, demonstramos um procedimento de coloração para cartilagem usando laranja de safranina. Este método ajuda a visualizar a cartilagem e detectar qualquer dano.

Coloração Safranin-O: Um Método para Visualizar a Integridade Estrutural e a Celularidade da Cartilagem

Fonte: Zhao, Y., et al. Estabelecimento de um modelo induzido cirurgicamente em camundongos para investigar o papel protetor da progranulina na osteoartrite. J. Vis. ...

Para coloração de cartilagem, comece com uma seção de cartilagem fixada em formalina e embebida em parafina de um camundongo sacrificado.
Primeiro, mergulhe a amostra no substituto do xileno - um agente de limpeza não perigoso que remove a cera de parafina e expõe o tecido desidratado. Em seguida, trate a amostra com concentrações decrescentes de etanol para reidratar o tecido para posterior coloração.
Agora, core a amostra com hematoxilina de ferro de Weigert - uma mancha orgânica contendo íons ferrosos - e incube brevemente. As moléculas de hematoxilina formam complexos com íons ferrosos e penetram na célula. Os íons ferrosos atuam como mordentes e facilitam a ligação da hematoxilina aos ácidos nucléicos, conferindo-lhes uma cor azulada.
Em seguida, trate a amostra com o corante verde rápido - uma contracoloração que se liga ao tecido conjuntivo e confere uma cor verde. Em seguida, trate a amostra com uma solução de ácido acético para estabilizar as moléculas do corante. Por fim, core a amostra com laranja safranina - um corante catiônico - e incuba.
As moléculas de safranina carregadas positivamente migram em direção aos proteoglicanos carregados negativamente na cartilagem e se ligam a eles, conferindo uma cor vermelha. Em seguida, monte a lâmina em um meio de resina e visualize-a ao microscópio.
A cartilagem saudável parece intensamente vermelha devido à matriz extracelular rica em proteoglicanos, enquanto a cartilagem insalubre parece menos vermelha com sinais de dano tecidual.

Para realizar a coloração de Safranin-O, primeiro desparafinize as lâminas em oxileno por três a cinco minutos, repetindo o banho de oxileno duas vezes. Em seguida, hidrate as lâminas em um gradiente de etanol, terminando com água destilada. Em seguida, coloque as lâminas na solução de hematoxilina de ferro de Weigert, uma solução Fast Green a 0,05%, uma solução de ácido acético a 1% e uma solução de Safranin-O a 0,1%. Agora, monte as lâminas usando um meio resinoso.

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