Artigo de método

Coloração com azul de toluidina de seções de nervos periféricos: uma técnica para corar fibras nervosas mielinizadas para visualização da estrutura nervosa periférica

8 de julho de 2025

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Ghnenis, A. B. et al., Coloração com azul de toluidina de seções embebidas em resina para avaliação da morfologia do nervo periférico.J. Vis. Exp.(2018)

Este vídeo demonstra a técnica de coloração de seções de nervos periféricos de ratos tratadas com tetróxido de ósmio e embebidas em resina usando azul de toluidina. As seções de nervos coradas ajudam a visualizar as estruturas finas dos nervos periféricos.

Protocolo

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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Coloração com azul de toluidina

  1. Prepare uma solução a 1% de azul de toluidina dissolvendo 2 g de borato de sódio em 100 mL de água deionizada, adicione 1 g de azul de toluidina e mexa até dissolver. Filtrar a solução com papel de filtro (tamanho dos poros: 11 μm) e manter a solução num frasco opaco à temperatura ambiente durante um período máximo de duas semanas.
  2. Usando uma pipeta de plástico ou micropipetador, adicione uma gota de solução de azul de toluidina na parte superior das seções nervosas e deixe por 20-30 s.
  3. Enxágue todo o excesso de solução de azul de toluidina mergulhando suavemente as lâminas em uma jarra de água deionizada e repita 3-4 vezes até que as seções estejam limpas. Seque as lâminas pelo menos 15 min a 60 °C ou durante a noite à temperatura ambiente e, em seguida, cubra as seções com uma lamínula usando um meio de montagem regular. Examine as lâminas montadas imediatamente ou guarde-as em temperatura ambiente.
  4. Examinar ao microscópio óptico. Uma lente de imersão em óleo de 100X é recomendada para imagens detalhadas usadas para calcular as proporções g.

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Azul de Toluidina OSigma-AldrichT3260
Tetraborato de sódio decahidratadoAcros Orgânicos205950010
Vidro de cobertura do microscópioFisher Científico12545102
Micro slides VWR, Superfrost PlusVWRRolamento 48311-703
Forno de 100 WattsMillipore 6350115
Papel de filtro WhatmanSigma-AldrichWHA10010155
Microscópio de fluorescência OlympusCâmera CCD colorida e monocromática dupla, DP80
Pipeta de plástico de 3 mLSigma-AldrichZ331740

Reimpressões e permissões

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