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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Coloração e fatiamento do cérebro
- Após o experimento de oclusão da artéria cerebral média, remova o cérebro, incluindo o tronco cerebral, do crânio e lave-o em PBS gelado.
- Escolha o tamanho correto da matriz de aço inoxidável do cérebro (consulte a Tabela de Materiais) dependendo do peso dos animais (Figura 1B). Coloque o cérebro com o lado ventral para cima na matriz cerebral.
nota: Quando sentado na matriz, a superfície ventral do cérebro deve estar paralela à superfície superior do molde.
- Usando lâminas, restrinja as partes frontal e caudal (2 lâminas de ambos os lados) do cérebro.
nota: Lâminas de barbear compatíveis com matriz de corte devem ser usadas. Em geral, uma lâmina de barbear compatível de borda única (espessura de até 0,01 polegada (0,254 mm)) pode ser usada para fatiar o cérebro de rato.
- Coloque as lâminas parcialmente (não cortando totalmente o cérebro) nos canais entre a primeira e a última lâmina. Quando todas as lâminas estiverem inseridas e dispostas em paralelo, pressione todas as lâminas para baixo com a palma da mão ao mesmo tempo para cortar o cérebro em fatias coronais de 2 mm.
- Segure as lâminas firmemente ao longo dos lados com dois dedos e remova-as junto com o cérebro fatiado da matriz.
- Disponha as fatias de cérebro uma a uma em uma bandeja (70 mL, 72 x 72 mm). Ao organizar as fatias, certifique-se de que a superfície anterior de cada fatia esteja sempre voltada para cima.
- Despeje a solução morna (+37 °C) de TTC a 1% em PBS nas fatias de cérebro e incube-as por 8 min a 37 °C no escuro.
nota: As fatias de cérebro devem ser totalmente imersas em solução TTC durante a incubação.
- Após a incubação em solução de TTC a 1%, transfira as fatias de cérebro para a bandeja de plástico azul para capturar imagens. Organize as fatias do cérebro em ordem sequencial da parte frontal para a caudal e use um bisturi para separar os hemisférios no plano sagital.
