Coloração de Papanicolaou: uma técnica para visualizar as características citológicas das células tubárias

Resumo

Fonte: Chen, H. et al. Citologia tubária da trompa de Falópio como uma ferramenta promissora para a detecção precoce do câncer de ovário. J. Vis. Exp. (2017).

Neste vídeo, demonstramos um protocolo modificado de coloração de Papanicolaou para estudar a citologia tubária. Esta técnica pode ser usada para visualizar as características citológicas de células epiteliais malignas e não malignas da trompa de Falópio.

Protocolo

1. Protocolo de coloração de Papanicolaou modificado

1. Manchar as lâminas manchadas de tecido executando o procedimento automatizado de coloração não ginecológica, conforme ilustrado na Tabela 1.
   NOTA: O método de coloração representa uma modificação da técnica de coloração de Papanicolaou que usamos rotineiramente para amostras não ginecológicas. Usamos um processador de tecidos automatizado para corar algumas lâminas. Escolhemos o procedimento de coloração não ginecologista em vez do procedimento de coloração ginecologista neste estudo. A eosina usada é EA-65, em vez da EA-50 usada para amostras ginecológicas (amostra de esfregaço de Papanicolaou). Além disso, o OG-6 no procedimento de coloração Gyn, que é principalmente para coloração de células escamosas, não está incluído no procedimento de coloração, uma vez que não se espera que células escamosas sejam vistas neste estudo. EA65 (Eosin Azure) é uma solução de contra-coloração composta por 3 corantes: Eosin Y, Fast green FCF e Bismarck brown Y. O procedimento está ilustrado na Tabela 1.
2. Execute um procedimento manual rápido de coloração de Papanicolau da seguinte forma:
   1. Mergulhe a lâmina manchada de tecido em etanol a 95%, 10 vezes, com cada mergulho levando cerca de 1 s.
   2. Mergulhe a lâmina em H₂O, 10 vezes, com cada mergulho levando cerca de 1 s.
   3. Emergir a lâmina em hematoxilina por 10 - 60 s.
   4. Mergulhe a lâmina em H₂O, 10 vezes, com cada mergulho levando cerca de 1 s.
   5. Mergulhe a lâmina em etanol a 95%, 10 vezes, com cada mergulho levando cerca de 1 s.
   6. Emergir o slide em EA65 por 1 - 3 min.
   7. Mergulhe a lâmina em H₂O, 10 vezes, com cada mergulho levando cerca de 1 s.
   8. Mergulhe a lâmina em etanol a 95%, 10 vezes, com cada mergulho levando cerca de 1 s.
   9. Mergulhe a lâmina em xileno até que ela fique clara.
      NOTA: Este é um procedimento de coloração de Papanicolaou modificado. Este método é usado como um método de coloração mais rápida para casos com tempo ou espaço limitados, como aspiração por agulha fina no local e amostras STAT. Este procedimento fornece coloração de qualidade comparável ao procedimento automatizado de coloração não ginecológica. O procedimento está ilustrado na Tabela 2.

Tabela 1: Etapas de coloração não ginecológica.

95% de etanol	5 min
H2O	10 segundos
Hematoxilina	15 seg - 3 min
H2O destilado	5 min
95% de etanol	30 segundos
EA65	2 - 5 min
95% de etanol	30 segundos
95% de etanol	30 segundos
100% Etanol	30 segundos
100% Etanol	30 segundos
xileno	30 segundos
xileno	5 min

Tabela 2: Etapas rápidas manuais da mancha de Papanicolau.

95% de etanol	10 mergulhos
H2O	10 mergulhos
Hematoxilina	10 seg-1 min
H2O destilado	10 mergulhos
95% de etanol	10 mergulhos
EA65	1 - 3 min
95% de etanol	10 mergulhos
100% Etanol	10 mergulhos
xileno	Mergulhe até ficar claro

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Coloração de Papanicolaou, EA 65	Sigma Aldrich	HT40432
95% de etanol	Sigma Aldrich	652261
100% Etanol	Sigma Aldrich	493538
xileno	Sigma Aldrich	214736
Hematoxilina	Sigma Aldrich	H9627