Coloração tricrômica de Masson Goldner: uma técnica para visualizar colágeno em seções cardíacas para detecção de fibrose cardiovascular

Resumo

Fonte: Valentin, J., et al. Quantificação histológica do infarto crônico do miocárdio em ratos. J. Vis. Exp.(2016).

Este vídeo demonstra a coloração diferencial de fibras de colágeno, núcleos e citoplasma no tecido cardíaco para visualizar o crescimento fibrótico associado a patologias cardíacas.

Protocolo

1. Coloração tricrômica Masson-Goldner

1. Faça cortes de tecido de blocos cardíacos embebidos em parafina com um micrótomo manual (espessura: 5 μm).
2. Manchar uma lâmina de cada parte do coração para cada rato (3 - 4 cortes transversais por lâmina) com coloração tricrômica de Masson-Goldner.
   1. Derreta as lâminas a 60 °C em um forno. Sob uma capela de exaustão, desparafinize-os em xilol duas vezes por 10 min cada. Reidrate-os em etanol 100%, etanol 95%, etanol 70% e água destilada por 3 min cada.
   2. Fixe-os na solução Bouin durante a noite. Em seguida, enxágue-os em água corrente da torneira por 10 a 15 min. Lave-os em água destilada. Incube-os na hematoxilina de Mayer por 3 min.
   3. Retire as lâminas e deixe-as em água destilada por 5 min. Em seguida, incube-os em ácido Fuchsin-Ponceau por 5 min. Enxágüe-os em ácido acético a 1% por 1 min.
   4. Em seguida, incube-os em ácido fosfomolíbdico Orange G por 1 min. Lave-os em ácido acético a 1% por 1 min, incube-os em corante verde claro por 10 min e enxágue-os em ácido acético a 1% por 1 min.
   5. Desidrate-os em etanol 70% (30 seg), etanol 95% (30 seg) e etanol 100% (5 min). Coloque uma gota de um meio de montagem resinoso nas seções de tecido, cubra-as com lamínulas e deixe-as secar.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Hematoxilina de Mayer	MHS32-1L	Sigma Aldrich
Fucsina ácida CI 42685	F8129-50G	Sigma Aldrich
Ponceau Xylidin CI 16150	P2395-25G	Sigma Aldrich
Laranja G CI 16230	O3756-100G	Sigma Aldrich
Verde claro CI 42095	L5382-25G	Sigma Aldrich
Xilol	10315083	Honeywell
Etanol absoluto	10303990	Honeywell
Microscópio estereológico	SM2800	Nikon
Formaldeído	Rolamento 99340	Reactolab
de incorporação	K113.1	Carl Roth
Software de medição de imagem Bersoft		Bersoft.com	Software licenciado