Método de coloração dupla: uma técnica para visualizar as interações planta-fungo usando vermelho de rutênio e lactofenol azul de algodão

Neste artigo

Resumo

Fonte: Marques, J. P. R., e Nuevo, L. G. Método de coloração dupla para detectar pectina na interação planta-fungo. J. Vis. Exp. (2022).

Este vídeo demonstra um método de coloração dupla usando vermelho de rutênio e lactofenol azul de algodão para visualizar pectinas e quitinas durante as interações planta-fungo em uma planta de ferrugem do café. O procedimento ajuda a entender os mecanismos de defesa das plantas durante infecções fúngicas.

Protocolo

1. Processo de coloração dupla

Comece com seções foliares ultrafinas e embebidas em resina de Coffee arabica cv. Catuaí infectadas com ferrugem do café. Cubra as seções com 2 mL de azul de algodão a 5% em lactofenol (40% de glicerol, 20% de fenol e 20% de ácido lático em água) e aqueça-as em uma placa quente a 45 ° C por 5 min (Figura 1A).
Remova o excesso de corante lavando a lâmina três vezes em um copo cheio de água destilada (Figura 1B-D).
Corar com 2 mL de vermelho de rutênio a 0,01% em água por 1 min (Figura 1E).
Remover o excesso de corante lavando a lâmina três vezes num copo cheio de água destilada (figura 1F,G).
Coloque uma gota de água destilada sobre as seções e cubra as seções com uma lamínula de 24 mm x 60 mm para realizar a análise de microscopia de luz.

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Resultados

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Figura 1: Detalhes das etapas individuais do protocolo de coloração dupla. (A) Cubra as seções com gotas de lactofenol azul de algodão e aqueça as lâminas em uma placa quente a 45 ° C. (BC) Remova o excesso de corante lavando em água destilada. (D) Seções nas lâminas de vidro após a lavagem (indicadas por setas). (E) Cubra as seções com gotas de vermelho de rutênio....