Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Quantificação de fibrose tecidual
- Coloque o tecido cardíaco fixado com paraformaldeído em um dispositivo de corte de tecido e corte cortes de 2 mm de espessura. Coloque as seções de tecido em um embutido. Desidrate o tecido por meio de uma série de banhos de álcool graduados (50%, 75%, 95% e 100% por 1 hora cada).
- Infiltre o tecido com xileno por 1 hora e, finalmente, em cera por 1 hora. Coloque o tecido infiltrado em um de incorporação e embutir com cera de parafina. Armazene os tecidos embutidos em blocos de parafina em temperatura ambiente até a microtoming.
- Corte o tecido embutido em seções de 4 μm de espessura. Colocar as secções num banho-maria a 45 ºC. Mergulhe uma lâmina de vidro no banho-maria em ângulo e aproxime-se gradualmente das bordas da seção de parafina para permitir a fixação parcial à lâmina.
- Mova a corrediça para dentro e para fora do banho para remover possíveis bolsas de ar sob a seção de tecido e facilitar uma melhor fixação. Secar as lâminas a 37 ºC durante 1 hora e guardá-las à temperatura ambiente para coloração histológica.
- Coloque o slide em um tanque. Desparafinizar a lâmina com xileno por 30 min e reidratar em álcool diluído sequencialmente (95%, 75% e 50% por 3 min cada) e, finalmente, em água destilada. Utilize uma solução vermelha de picrosirius adequada para cobrir completamente as secções de tecido durante 1 hora. Enxágue as lâminas em uma solução de ácido acético a 0,5% para duas trocas e, em seguida, faça dois enxágues em álcool absoluto.
- Seque a lâmina ao ar livre e monte-a em resina sintética com uma lamínula. Fotografe o slide em um campo de luz visível.
nota: A área vermelha na fotografia mostra uma zona positiva vermelha picrosirius sob um microscópio com ampliação de 200X. Calcule a porcentagem da zona positiva vermelha do picrosírius sobre a área total, o que indica a extensão da fibrose.
