Coloração com vermelho Congo: uma técnica para visualizar depósitos de celulose em seções de caules de plantas

Resumo

Fonte: Pradhan Mitra, P., Loqué, D. Coloração histoquímica de elementos secundários da parede celular de Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (2014).

Neste vídeo, demonstramos o método de coloração com vermelho Congo para visualizar depósitos de celulose em seções de caule de Arabidopsis thaliana.

Protocolo

1. Coloração de vermelho Congo

1. Dissolva 0,5 g de vermelho congo em 100 ml de água destilada para preparar uma solução vermelha de congo a 0,5%.
2. Transfira as seções da haste para um tubo de microcentrífuga de 2,0 ml. Adicione 1 ml da solução vermelha de Congo a 0,5% ao tubo. Pipetar suavemente a solução vermelha de Congo a 0,5% para cima e para baixo sem perturbar as secções.
   NOTA: Tenha cuidado para não pipetar as seções na ponta da pipeta, pois isso pode danificar as seções.
3. Incube em temperatura ambiente por 10 min e repita a pipetagem. Siga com mais 3 minutos de incubação em temperatura ambiente.
4. Use uma pipeta de 1 ml para retirar 700 μl de solução vermelha de Congo a 0,5%. Adicione 700 μl de água destilada para enxaguar a solução vermelha do Congo. Repita a lavagem 3-4x até que a solução de lavagem esteja límpida.
5. Use uma pipeta de 1 ml com a ponta cortada de forma que as seções possam ser pipetadas facilmente sem danos. Pipete suavemente as seções na ponta e em uma lâmina de microscópio e cubra-as com lamínula. Observe as amostras na lâmina do microscópio sob excitação de luz azul usando um filtro com uma passagem de banda de 560/40.
   NOTA: Não armazene as seções na água por muito tempo antes da análise microscópica, pois a água lavará o vermelho congo em 10-30 min.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tinto Congo	sigma	C6277	3,3'-[[1,1'-bifenil]-4,4'-diilbis(azo)]bis(1-sulfonato de 4-aminonaftaleno) dissódico [número CAS 573-58-0]
Tubos de microcentrífuga (0,6 ml)	Axygen Scientific	MCT-060-C
Câmera com chip CCD sem obturador mecânico	Hamamatsu	C4742-95
Câmera colorida de alta velocidade	QImaging	MicroPublisher 5.0 RTV
Software da câmera	Dispositivos Moleculares	MetaMorph versão 7.7.0.0
Imaginando análise	adobe	Photoshop CS4
Micro Óculos de Cobertura, Quadrado, No. 1	VWR	Nº 48366-067	22 x 22 mm (7/8 x 7/8") - Os vidros de cobertura são resistentes à corrosão e uniformemente espessos e planos. A espessura nº 1 é de 0,13 a 0,17 mm.
Micro corrediças foscas, 1 mm	VWR	Nº 48312-003	75 x 25 mm - 1 mm
Cubo de filtro TX2	Leica	11513851/11513885	Filtro usado para análise de vermelho Congo com uma passagem de banda de 560/40.