Espectroscopia de correlação difusa para avaliar o fluxo sanguíneo cerebral em um modelo de camundongo

Neste artigo

Resumo

Fonte: Brothers, R. O., et al. Análise de Sistemas da Resposta Neuroinflamatória e Hemodinâmica à Lesão Cerebral Traumática. J. Vis. Exp. (2022)

Neste vídeo, demonstramos a técnica de espectroscopia de correlação difusa para medir o fluxo sanguíneo cerebral em um modelo de camundongo com lesão cerebral traumática leve.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE

1. Avaliação do fluxo sanguíneo cerebral com espectroscopia de correlação difusa

Aquisição de dados DCS
1. Remova o cabelo do couro cabeludo. Como o DCS funciona melhor na ausência de pelos, é necessário remover os pelos da cabeça antes do início dos experimentos. Normalmente, a depilação é feita 1-3 dias antes do início do estudo.
  1. Induza camundongos com isoflurano a 4,5% em oxigênio a 100% por 45 segundos e mantenha com isoflurano a 1-2% em oxigênio a 100%.
  2. Raspe a cabeça entre os olhos e as orelhas. Em seguida, use creme depilatório para remover o pelo da cabeça como na Figura 1.
  3. Permita que o animal se recupere da anestesia em uma almofada de aquecimento e depois retorne à gaiola.
2. Meça o fluxo sanguíneo cerebral com DD. Para minimizar os artefatos de movimento durante a medição, estude camundongos sob breve anestesia com isoflurano.
  nota: Monitore visualmente a respiração e a resposta ao beliscão do dedo do pé durante as medições e ajuste a concentração de isoflurano conforme necessário para garantir uma profundidade consistente da anestesia. Variações significativas na profundidade da anestesia podem alterar o fluxo sanguíneo, dados os conhecidos efeitos vasomoduladores do isoflurano.
  1. Induza com isoflurano a 4,5% em oxigênio a 100% por 45 segundos e, em seguida, mantenha com isoflurano a 1,0-1,75% em oxigênio a 100%. Confirme a profundidade suficiente da anestesia pela ausência de uma resposta de pinça do dedo do pé e respiração normal (entre ~ 60-80 respirações por minuto).
  2. Após um período de estabilização de 2 minutos, posicione suavemente o sensor DCS sobre o hemisfério direito, de modo que a borda superior do sensor óptico se alinhe com a parte de trás do olho e a lateral do sensor se alinhe ao longo da linha média (Figura 1). Coloque a mão sobre o sensor para protegê-lo da luz ambiente. Adquira 5 segundos de dados (aquisição de 1 Hz).
  3. Reposicione o sensor sobre o hemisfério esquerdo e adquira 5 segundos de dados.
  4. Repita 3 vezes/hemisfério para levar em conta as heterogeneidades locais sob a superfície do tecido.
3. recuperação
  1. Remova o mouse da anestesia e coloque-o em uma almofada de aquecimento.
  2. Depois que o mouse recuperar seu reflexo de endireitamento, devolva-o à gaiola.

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Resultados

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Figura 1: Medição do fluxo sanguíneo cerebral por espectroscopia de correlação difusa. (A) Um sensor óptico é segurado manualmente sobre o hemisfério direito para medir o fluxo sanguíneo em um camundongo anestesiado. (B) Colocação representativa do sensor no hemisfério direito. O contorno do sensor é representado como um retângulo preto tracejado, e a localização da fonte e das fibra...