Cirurgia Nó murino superficial linfático

Summary

Para seguir a progressão de uma resposta imune ao longo do tempo dentro do mesmo rato, gânglios linfáticos pode ser sequencialmente removido por cirurgia. Aqui, nós descrevemos como esta técnica pode ser realizada.

Abstract

No campo da imunologia, para compreender a progressão de uma resposta imunitária contra uma vacina, uma infecção ou um tumor, a resposta é muitas vezes seguida ao longo do tempo. Do mesmo modo, o estudo da homeostase de linfócitos, requer a realização do curso de tempo. Realização destes estudos, dentro do mesmo rato é ideal para reduzir a variabilidade experimental, bem como o número de ratinhos utilizados. Retirada de sangue permite realização de experimentos do curso de tempo, mas ele só dá informações sobre linfócitos circulantes e fornece um número limitado de células ^1-4. Uma vez que os linfócitos circulam pelo corpo e que residem nos gânglios linfáticos têm propriedades diferentes, é importante examinar ambos os locais. A remoção sequencial de nódulos linfáticos por cirurgia proporciona uma oportunidade única para seguir uma resposta imune ou expansão de células imunes no mesmo rato ao longo do tempo. Além disso, esta técnica produz entre 1-2x10 células por ⁶ nó de linfa que é suficiente para perform caracterização fenotípica e / ou ensaios funcionais. Cirurgia nó de linfa ou seqüencial linfadenectomia foi usada com sucesso por nós e outros ^5-11. Aqui, nós descrevemos como os nódulos linfáticos inguinais braquial e pode ser removido através de uma pequena incisão na pele de um rato anestesiado. Desde a cirurgia é superficial e feito rapidamente, o mouse se recupera muito rapidamente, é que cura bem e não sentir dor excessiva. Cada segundo dia, é possível colher um ou dois nódulos linfáticos, permitindo para experiências de curso de tempo. Esta técnica é portanto adequado para estudar as características de nódulo linfático que residem linfócitos ao longo do tempo. Este método é adequado para vários projetos experimentais e acreditamos que muitos laboratórios se beneficiariam de realização de cirurgias seqüenciais nó de linfa.

Protocol

1. Preparação antes da cirurgia

Os ratos foram tratados de acordo com o Conselho Canadense sobre as orientações de cuidados com animais.

1. Ratinhos anestesiar por injecção de cetamina / xilazina (150/300 mg / kg, ip) ou por inalação de isoflurano (2%, oxigénio 1L). Se estiver disponível, isoflurano deve ser utilizado, pois permite um melhor controlo da anestesia tempo e profundidade. Além disso, o oxigénio é administrado ao mesmo tempo que suporta as funções fisiológicas do animal. Além disso, isoflurano está directamente eliminado pelos pulmões e, assim, não necessita de metabolização hepática ou renal.
2. Injectar a bupr....

Discussion

Nós descrevemos um protocolo de cirurgia LN que pode ser aplicado a muitos sistemas experimentais. Embora muito útil para acompanhar as respostas imunes ou homeostase de células imunes, esta técnica tem algumas limitações. Em primeiro lugar, apenas quatro LNS pode ser colhido. Em segundo lugar, a resposta imune deve ser estudada sistémica ou ocorrer nas inguinais superficiais ou braquial (pele de drenagem) LNS. Finalmente, o número de células colhidas é influenciada pela qualidade da remoção LN, uma limitação técnica, q.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome do reagente	Companhia	Número de Catálogo	Comentários
Pinça Graefe premium Belas Padrão	Harvard Apparatus	52-2144	Fortemente curvada, 10 cm (4 polegadas), 0,8 milímetros de ponta
Clipe Michel aplicação e remoção de Pinças	Harvard Apparatus	52-3779	12,5 cm (5 cm)
Michel clip 100	Harvard Apparatus	52-3746	7,5-1,75 milímetros
Temgesic (cloridrato de buprenorfina)	Schering-Plough
Vetalar (cloridrato de ketamina)	Boniche animal Healthcare		DIN: 01989529
Rompun (Xylazina)	Bayer		DIN: 02169592
Isoflurano	ABBOTT		DIN: 02032384
Hypotears pomada	Novartis Ophtalmics		DIN: 02133288
Baxedin (clorexidina gluconato 2% em álcool isopropílico a 70%)	Ómega	L0000017	DIN: 02251477