Preparação de um mouse Awake para gravar as respostas neurais e injetando Tracers

Resumo

Caracterização eletrofisiológica das respostas neuronais é importante para compreender o funcionamento do cérebro e para orientar a colocação de corantes para caminho traçado. No entanto, muitos estudos são realizados em animais anestesiados. Para entender o funcionamento do cérebro sem anestesia, foi desenvolvido um método para registrar propriedades resposta neuronal e injetar corantes no rato acordado.

Resumo

É bem conhecido que a anestesia altera as propriedades de resposta neurais em várias regiões do cérebro. ^13. No sistema auditivo, as propriedades fundamentais de resposta de neurônios do tronco cerebral como a tolerância, a especificidade, freqüência e bandas laterais inibitórias são alteradas de forma significativa sob anestesia ^1-2. Estas observações levaram os fisiologistas a buscar maneiras de gravar a partir de neurônios sem os efeitos contaminantes da anestesia. Um resultado foi uma preparação descerebrada, onde o tronco cerebral foi completamente seccionado ao nível do mesencéfalo ^4. As desvantagens desta preparação é uma cirurgia formidável, a eliminação de descer projeções do cérebro anterior, e uma incapacidade de usar a estimulação sensorial para examinar as estruturas acima do mesencéfalo. Uma estratégia diferente foi a implantação de eletrodos cronicamente a gravar a partir de neurônios isolados e aglomerados multiunidade enquanto o animal está acordado e / ou comportar ^5,6 7-9 ao mouse ^10-12. Usando este método, somos capazes de realizar gravações eletrofisiológicas durante vários dias no rato não anestesiados. No final das sessões de gravação, então podemos injectar um corante para reconstruir as posições de eléctrodos e os locais de gravação ou de injectar um traçador de modo que as vias de e para os loci de gravação pode ser determinada. Este método permite assim isolado gravações único neurónio durante vários dias sem os anestésicos de uso.

Protocolo

1. Encosto de cabeça Visão

1. Para montar um custom-built cabeça pós-, insira um 1/16 "em aço inoxidável rolo pin-perpendicularmente em um buraco perfurado em 3/32" haste de aço inoxidável para formar uma cruz. A peça vertical da cabeça pós-deve ser cerca de 20 mm ea peça transversal horizontal de cerca de 15 mm. Toque uma extremidade da haste vertical para aceitar um parafuso # 1-72. (Fig. 1).
2. Durante a cirurgia e gravação, a cabeça de pós-está protegido num latão construído sob encomenda ou barra de alumínio de montagem com um 1-72 # parafuso (Fig. 2). A peça long....

Discussão

A vantagem do sistema de apoio de cabeça pós-para experimentos eletrofisiológicos e neuroanatômicas em rato é que os experimentos podem ser realizados com anestesiados, ratos acordados, eliminando a contaminação potencial de resposta devido à drogas anestésicas. Além disso, a configuração pode ser usada durante vários dias para permitir o uso de animais mais eficiente.

A maioria dos componentes para a pós-cabeça estão disponíveis off-the-shelf. Apenas a cabeça pós-montagem e aparelhos são fe.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Nome	Companhia	Número de catálogo	Comentários
Gel de Etch para a limpeza do crânio antes de cimento dental	Henry Schein	101-5396	12/pk com 1,2 mL seringas
Primer para o cimento dental	Kerr Optibond	25881	8 mL
Adesivo para cimento dental	Kerr Optibond	25882	8 mL
Aplicadores para cimento dental	Kerr Optibond	24680	200/pk
Cimento dentário	Carisma, Heraeus Kulzer	66000085	Refil Seringa 4GM
Rod Tungsténio (pino terra)	Sistemas de AM	717200	0,010 "de diâmetro
Economia de luz de cura UV	Henry Schein	CU-80
Cabeça de pós-	Construído em casa
Barra de montagem	Construído em casa
Bloco de montagem	Construído em casa
Estereotáxica	David Kopf Instruments	902
Mouse e adaptador de ratos neonatos	Stoelting	51625
Deltaphase Pad isotérmico	Braintree Scientific, Inc.	39DP