Usando Ovos de<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; Como um<em&gt; Em vivo</em&gt; Modelo de Helmintos induzida por inflamação pulmonar

Resumo

Ovos de Schistosoma mansoni são potentes estimuladores do tipo T helper 2 (Th2) resposta imunológica, característica da infecção por parasita, asma e inflamação alérgica. Este protocolo utiliza S. mansoni injecção de ovo para gerar CD4 de resposta de citocinas induzida por Th2 inflamatória no pulmão, caracterizada por formação de granuloma pulmonar em torno do ovo, eosinofilia e macrófagos activação alternativa.

Resumo

Parasitas Schistosoma são vermes de sangue que infectam cerca de 200 milhões de pessoas em todo o mundo ^1. Na infecção crónica com Schistosoma, a patologia grave, incluindo fibrose hepática e esplenomegalia, é causada pela resposta imunitária aos ovos do parasita ao invés de o próprio parasita ^2. Ovos do parasita induzir uma resposta Th2 caracterizada pela produção de IL-4, IL-5 e IL-13, a activação de macrófagos alternativa eo recrutamento de eosinófilos. Aqui, nós descrevemos injecção de ovos de Schistosoma mansoni como um modelo para examinar parasita respostas específicas de citocinas Th2 no pulmão e gânglios linfáticos de drenagem, a formação de granulomas pulmonares em torno do ovo, e inflamação das vias aéreas.

Após sensibilização intraperitoneal e desafio intravenosa, S. ovos mansoni são transportados para o pulmão através das artérias pulmonares, onde são presos no interior do parênquima pulmonarpor granulomas compostos de linfócitos, eosinófilos e macrófagos alternativamente activados ^3-6. Associadas com inflamação formação de granuloma, nos espaços bronco-alveolar, a expansão dos nodos linfáticos de drenagem e activação das células T CD4 pode ser observado. Aqui detalhamos o protocolo para o isolamento de ovos de Schistosoma mansoni a partir de fígados infectados (modificado de ^7), sensibilizando e desafiando camundongos, e recuperando os órgãos (lavado bronco-alveolar (LBA), pulmão e linfonodos de drenagem) para análise. Nós também incluir histológico dados representativos e imunológicas e sugestões para análise imunológica adicional.

Em geral, este método proporciona um modelo in vivo para investigar as respostas induzidas por helmintos imunológicas no pulmão, que é amplamente aplicável para o estudo da Th2 doenças inflamatórias, incluindo infecção helmíntica, doenças fibróticas, inflamação alérgica e asma. As vantagens deste modelo para o estudo da type inflamação 2 no pulmão incluem a reprodutibilidade de uma resposta Th2 potente inflamatória no pulmão e gânglios linfáticos de drenagem, a facilidade de avaliação da inflamação por exame histológico dos granulomas em torno do ovo, eo potencial para armazenamento a longo prazo do parasita ovos.

Protocolo

1. Purificação Schistosoma mansoni Ovos

1. Infect suíça Webster-murganhos com cercarias esquistossomo, que é a fase infecciosa na vida Schistosoma ⁸ ciclo. Alternativamente, obter esquistossomo camundongos infectados a partir do NIAID Esquistossomose Resource Center ( http://www.schisto-resource.org/~~V ). Deixar ratinhos durante 6-7 semanas após a infecção, através da qual ponto do tempo, os ovos são presente no fígado e pode ser recuperado como descrito abaixo (ver fig. 1).
2. Euthanize ratinhos com CO _2, e molhada com etanol a 70%.....

Discussão

Aqui, um modelo empregando ovos de Schistosoma mansoni para induzir a inflamação do pulmão do tipo 2 é descrito. Características deste modelo incluem a resposta Th2 potente imunológico, inflamação das vias aéreas e formação de granuloma pulmonar. Uma vez que estes parâmetros são dependentes de respostas de células T CD4 + Th2 ^11, este é um modelo útil para investigar os efeitos da proteína deleções ou específicos de linhagem específica sobre respostas de células Th2. Aqui, as leituras iria incluir a .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Reagente	Tamanho / Descrição	Companhia	Catalogo
Colagenase / dispase	500 mg	Roche Applied Science	11 097 113 001
Diff Quik Hema 3 Stain	Empacotar	Fisher Scientific Co. LLC	122-911
DMEM	Líquido	Gibco	11965
Falcon de 50 mL	Empacotar	Falcão	352070
Intramedic Tubing PE	0,58 milímetros	Becton Dickinson and Co.	427410
Isoflurano	250 mL	Abade da Saúde Animal	52600405
Ketamina	100 mg / mL	Fort Dodge, Saúde Animal	N / A
Anticorpo para o receptor de manose	Biotina	Abd Serotec	MCA2235B
Filtro metálico	Coador de cozinha padrão	Alvo	Laurentiis
Paraformaldeído	16%	Electron Microsc. Ciências	15710
Penicilina / estreptomicina	100x	Gibco	15070
Percoll	1 litro	GE Healthcare Biosciences	17 01 0891
Anticorpo RELMα	50 ug	Peprotech	500-P214
Fio cirúrgico	2,0 USP 100 yds	Surgical Specialties Corp	SP118
Agulha de seringa	23g, 3/4 polegada	BD Vacutainer Lab. Med.	305143
EUA Standard Testing Sieve	150 æM, 0,0059 "	WS Tyler, Inc.	ASTME-11, Spec. N º 100
Xilazina	20 mg / mL	Mordomo	N / A