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Manutenção de antígeno-específicas linhas de células T ou clones na cultura exige rodadas de antígeno-induzida ativação separados por fases de 1,2 expansão celular. Adição de interleucina 2 para o meio de cultura durante a fase de expansão é necessária para evitar a morte celular e suficiente para manter a curto prazo linhas de células T, mas foi mostrado para aumentar a polarização Th1 3. Substituição de interleucina 2 pelo fator de crescimento de células T (TCGF), que contém uma mistura de citocinas é mais eficaz do que a interleucina 2 na manutenção a longo prazo linhas de células T in vitro 3. Além disso, TCGF pode ser facilmente preparado em grandes quantidades no laboratório e é muito mais barato do que a interleucina 2 recombinante.
Aqui, vamos mostrar como preparar TCGF sobrenadantes de esplenócitos de ratos cultura. Para este procedimento, colhemos baços de ratos Lewis ingênuo sacrificados para timo e coleta de sangue. Nós preparamos uma única célula suspensões de baço, Lyze as células vermelhas do sangue por choque osmótico, ea semente da esplenócitos em meio de cultura. As células são estimuladas com concanavalina A, um mitógeno que os não-seletivamente ativa todos os linfócitos T de ratos, induzindo a produção de citocinas. A cultura é supernantant coletadas 48 horas depois concanavalina A andexcess é obrigado a alfa metil mannoside para impedi-lo de ativar linhas de células T para que TCGF será adicionado. O TCGF é então filtrado estéril, aliquotado e armazenado a -20 ° C.