O número de novembro do Journal of Visualized Experiments começa com uma série de experimentos comportamentais para medir a capacidade de preensão em primatas. Pesquisadores da Universidade de Friburgo demonstram quatro tarefas de preensão e alcance, que seguem etapas comuns para restringir confortavelmente o animal e posicionar corretamente sua cabeça. O teste do Brinkman Board é usado para avaliar o alcance de objetos estáticos, enquanto o Brinkman Board Rotativo apresenta uma condição na qual os animais precisam antecipar a posição do objeto. O teste da Caixa Brinkman permite investigar a destreza em condições nas quais o macaco tem menos graus de liberdade para realizar a tarefa de preensão e não pode usar a visão para orientar o movimento. Enquanto os testes do Brinkman Board e da Caixa Brinkman dependem exclusivamente da análise de vídeos obtidos durante os experimentos, o aparato da tarefa de alcance de gaveta possui detectores que monitoram as forças de preensão e carga, bem como a posição da gaveta, gerando dados e tornando este teste adequado para medir força e capacidade de preensão. Em conjunto, esses quatro testes oferecem uma abordagem poderosa para avaliar o controle motor no membro anterior distal, e o grupo de Friburgo apresenta dados de estudos com lesões e experimentos destinados a testar terapias potenciais para lesões da medula espinhal.
Na seção de Medicina Clínica e Translacional, colaboradores da Divisão de Pesquisa Cirúrgica do Hospital Universitário de Zurique e do Instituto de Ciência de Animais de Laboratório da Universidade de Zurique trabalham juntos para implantar um dispositivo de radiotelemetria em camundongos, que pode ser usado para obter medidas fisiológicas em animais livres para se movimentar. Os dispositivos consistem em dois eletrodos, capazes de medir atividade biopotencial (ECG, EEG ou EMG) e temperatura, e um transmissor de rádio leve (com largura de banda de 1-200 Hz) que pode ser implantado na cavidade abdominal. O estresse provocado pelo manejo dos animais, bem como a anestesia, são fatores de confusão conhecidos que afetam as medidas fisiológicas; portanto, os dispositivos de radiotelemetria são uma maneira conveniente de adquirir dados fisiológicos de animais em estado natural e inalterado, além de permitir a coleta simultânea de dados de múltiplos animais.
O JoVE também acrescenta à sua coleção de protocolos de eletroporação um método para introduzir macromoléculas no mesênquima craniofacial de girinos em desenvolvimento de Xenopus laevis, proveniente do Laboratório Liu do King's College London. Girinos de Xenopus são transferidos para uma câmara de eletroporação, onde podem ser injetados com ácidos nucleicos e, em seguida, submetidos à eletroporação, que irá entregar vetores de expressão ou morpholinos para o tecido craniofacial em desenvolvimento. A entrega gênica em cartilagem diferenciada é inerentemente problemática, e o laboratório Liu mostra que, por meio da eletroporação, morpholinos podem ser introduzidos nos tecidos procartilaginosos e cartilaginosos do girino de Xenopus ao longo de diversas fases de desenvolvimento.
Na seção de Bioengenharia, o grupo Zuckerman do Lawrence Berkeley National Laboratory ilustra seu método para sintetizar peptoides, uma classe de moléculas orgânicas biologicamente ativas que se assemelham a peptídeos, mas têm suas cadeias laterais ligadas ao nitrogênio da ligação peptídica, em vez do carbono alfa, o que os torna resistentes à proteólise. O grupo Zuckerman demonstra a síntese por submonômeros, na qual monômeros peptídicos são adicionados sequencialmente em reações de bromoacetilação e deslocamento de brometo, permitindo controle preciso do comprimento e da composição da cadeia de peptoide. Além disso, o fato de a síntese ser realizada em resina de amida — e, portanto, ser uma síntese em fase sólida — simplifica grandemente a purificação dos peptoides sintetizados. Os autores também mostram como os peptoides recém-sintetizados podem ser induzidos a se autoagruparem em estruturas altamente ordenadas, denominadas nanolâminas, que podem ser visualizadas por microscopia de fluorescência e microscopia eletrônica de varredura. Essas nanolâminas poderiam servir como uma plataforma potencial para miméticos de proteínas e membranas.
Mais adiante no mês, o JoVE destaca um ensaio para medir a atividade fagocítica em células expostas a amostras clínicas de anticorpos na seção de Imunologia e Infecção. Colaboradores do Massachusetts General Hospital e do Dartmouth College mostram que células THP-1 englobam microesferas revestidas com antígeno ligado a anticorpos em microscopia de vídeo com lapso de tempo e apresentam um método baseado em placas com citometria de fluxo para quantificar o grau de fagocitose. Os autores utilizam este método para determinar a capacidade de diferentes amostras de anticorpos de induzir fagocitose, como aquelas provenientes de pacientes com HIV tratados e não tratados com terapias antirretrovirais.
Este resumo do conteúdo do JoVE em novembro fornece uma breve visão geral dos destaques do mês. Outros artigos notáveis incluem métodos para imagem em tempo real da dinâmica do citoesqueleto em células endoteliais, medição do fluxo de cálcio em cardiomiócitos e eletrofisiologia em fatias de neurônios recém-nascidos no bulbo olfativo.