Medidas do KV7 atividade do canal (KCNQ) de potássio em miócitos isolados arteriais (usando patch braçadeira técnicas eletrofisiológicas) em paralelo com medidas de constritores / dilatador respostas (usando Miografia pressão) pode revelar informações importantes sobre os papéis do KV7 canais em fisiologia do músculo liso vascular e farmacologia.
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Artigo de método
Explorando Arterial Músculo Liso KV7 função dos canais de potássio utilizando electrofisiologia patch clamp e Miografia Pressão
Neste artigo
Resumo
Resumo
Contracção ou relaxamento das células do músculo liso nas paredes das artérias de resistência determina o diâmetro da artéria e, assim, controla o fluxo de sangue através do vaso e contribui para a pressão arterial sistémica. O processo de contracção é regulado principalmente pela concentração de cálcio citosólico ([Ca 2 +] cit), que por sua vez é controlada por uma variedade de transportadores de iões e de canais. Canais iônicos são intermediários comuns em vias de transdução de sinal ativadas por hormônios vasoativas para efetuar vasoconstrição ou vasodilatação. E canais de iões são frequentemente alvo de agentes terapêuticos, quer intencionalmente (por exemplo, bloqueadores de canal de cálcio utilizado para induzir a vasodilatação e baixa pressão arterial) ou não intencionalmente (por exemplo, para induzir a indesejados efeitos secundários cardiovasculares).
KV7 (KCNQ) dos canais de potássio activados têm sido recentemente implicada como targ fisiológico e terapêutico importanteets para a regulação da contração do músculo liso. Para elucidar as funções específicas de canais em ambos KV7 transdução de sinal fisiológico e na acção dos agentes terapêuticos, é necessário estudar o modo como a sua actividade é modulada a nível celular, bem como de avaliar a sua contribuição no contexto da artéria intacta.
As artérias mesentéricas de rato proporcionar um sistema modelo útil. As artérias podem ser facilmente dissecados, limpos de tecido conjuntivo, e usada para preparar isolados miócitos arteriais em patch clamp electrofisiologia, ou canulada e pressurizado para medições de vasoconstritor / vasodilatador respostas sob condições relativamente fisiológicas. Aqui descrevemos os métodos utilizados para ambos os tipos de medições e fornecer alguns exemplos de como o projeto experimental pode ser integrado para fornecer uma compreensão mais clara dos papéis desses canais iônicos na regulação do tônus vascular.
Protocolo
1. Excisão cirúrgica da arcada vascular intestinal mesentérica Pequeno
- Anestesiar um 300-400 g de rato Sprague-Dawley, com isoflurano (4%), administrada por inalação.
- Executar uma laparotomia mediana para expor o mesentério do intestino delgado. Exteriorizar o intestino delgado e grosso através da incisão abdominal com grande cuidado, para evitar o trauma para o intestino expostos e mesentério. Gentilmente ventile o mesentério ao longo de gaze estéril.
- Cirurgicamente excisar o intestino delgado e uma porção do intestino grosso, incluindo o ceco (vasos sanguíneos cuidadosamente cortados ao longo das margens e das origens dos ramos princi....
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Discussão
Os métodos e abordagens experimentais aqui descritas são bastante robustos e podem produzir resultados claros e reprodutíveis quando aplicado com atenção meticulosa aos detalhes. Boas gravações electrofisiológicos e constrição / dilatação dos segmentos arteriais são dependentes da saúde das células e os segmentos de artéria, respectivamente. Preparações de células pode variar de dia para dia, mesmo usando o mesmo protocolo. Soluções de isolamento podem ser utilizadas durante até 2 semanas, mas, se a qualidade da prepara.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado por uma concessão do National Heart, Lung, and Blood Institute (NIH R01-HL089564) para KLB e pré-doutoramento da American Heart Association (09PRE2260209) e J. Arthur Schmitt Fundação BKM.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome | Companhia | Número de catálogo | Comentários |
| Cloreto de Sódio | Sigma | S5886 | Solução Dissecando: 145 Solução do banho de Eletrofisiologia *: 140 Solução interna para eletrofisiologia: 10 Solução de isolamento para os miócitos *: 140 Solução do banho para Miografia pressão: 145 Solução lúmen para Miografia pressão: 145 |
| Cloreto de potássio | Sigma | P5405 | Solução Dissecando: 4,7 Solução do banho de Eletrofisiologia *: 5,36 Solução interna para eletrofisiologia: 135 Solução de isolamento para os miócitos *: 5,36 Solução do banho para Miografia pressão: 4,7 Solução lúmen para Miografia pressão: 4,7 |
| EGTA de potássio | Sigma | E4378 | Solução interna para eletrofisiologia: 0,05 |
| HEPES | Sigma | H9136 | Solução do banho de Eletrofisiologia *: 10 Solução interna para eletrofisiologia: 10 Solução de isolamento para os miócitos *: 10 |
| Hidrogenofosfato dissódico | Sigma | S5136 | Solução de isolamento para os miócitos *: 0,34 |
| Hidrogeno-fosfato de potássio | Sigma | P5655 | Solução de isolamento para os miócitos *: 0,44 |
| Cloreto de Magnésio | Sigma | M2393 | Solução do banho de Eletrofisiologia *: 1,2 Solução interna para eletrofisiologia: 1 Solução de isolamento para os miócitos *: 1,2 |
| Cloreto de cálcio | Sigma | C7902 | Solução do banho de Eletrofisiologia *: 2 Solução de isolamento para os miócitos *: 0,05 |
| Fosfato de sódio | Fisher Scientific | BP331-1 | Solução Dissecando: 1,2 Solução do banho para Miografia pressão: 1,2 Solução lúmen para Miografia pressão: 1,2 |
| Sulfato de magnésio | Sigma | M2643 | Solução Dissecando: 1,17 Solução do banho para Miografia pressão: 1,17 Solução lúmen para Miografia pressão: 1,17 |
| MOPS | Fisher Scientific | BP308 | Solução Dissecando: 3 Solução do banho para Miografia pressão: 3 Solução lúmen para Miografia pressão: 3 |
| Ácido pirúvico | Sigma | P4562 | Solução Dissecando: 2 Solução para banhoMiografia pressão: 2 Solução lúmen para Miografia pressão: 2 |
| Dihidratado EDTA | Research Organics | 9572E | Solução Dissecando: 0,02 Solução do banho para Miografia pressão: 0,02 Solução lúmen para Miografia pressão: 0,02 |
| D-Glucose | Sigma | G7021 | Solução Dissecando: 5 Solução do banho de Eletrofisiologia *: 10 Solução interna para eletrofisiologia: 20 Solução de isolamento para os miócitos *: 10 Solução do banho para Miografia pressão: 5 Solução lúmen para Miografia pressão: 5 |
| Albumina de soro bovino | Sigma | A3912 | Solução Dissecando: 1% Lumen solução para Miografia pressão: 1% |
| pH | Dissecando Solution: 7.4 Solução do banho de Eletrofisiologia *: 7,3 Solução interna para eletrofisiologia: 7,2 Solução de isolamento para os miócitos *: 7,2 Solução do banho para Miografia pressão: 7,4 Solução lúmen para Miografia pressão: 7,4 | ||
| Osmolaridade | Solução Dissecando: 300 Solução do banho de Eletrofisiologia *: 298 Solução interna para eletrofisiologia: 298 Solução de isolamento para os miócitos *: 298 Solução do banho para Miografia pressão: 300 Solução lúmen para Miografia pressão: 300 | ||
* 11 | |||
Tabela 1. Componentes das soluções utilizadas no experimento. |
Referências
- Passmore, G. M. KCNQ/M Currents in Sensory Neurons: Significance for Pain Therapy. J. Neurosci. 23, 7227-7236 (2003).
- Falloon, B. J. Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparati....
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Reimpressões e permissões
