Transplante ortotópico de aorta em camundongos para o Estudo da Doença Vascular

Resumo

Descrevemos uma técnica em que uma secção da aorta abdominal de um rato é transplantado ortotopicamente para um pouco abaixo das artérias renais de um receptor alogénico ou singeneicos. Esta técnica pode ser útil em estudos em que o transplante de grandes artérias de tamanho uniforme é considerada vantajosa.

Resumo

Procedimentos vasculares que envolvem anastomoses no ratinho são geralmente pensado para ser difícil e muito dependente da habilidade do cirurgião. Isto é principalmente verdadeiro, mas há um certo número de princípios importantes que podem reduzir a dificuldade de esses procedimentos e melhorar a reprodutibilidade. Transplante ortotópico aórtica é um procedimento excelente para aprender esses princípios, porque envolve apenas dois end-to-end anastomoses, mas requer boa técnica de sutura e movimentação dos navios para o sucesso consistente. Este procedimento começa com a obtenção de um comprimento de aorta abdominal de um animal dador, seguido pela divisão da aorta nativa do receptor. A aorta obtido é então colocado entre as extremidades divididas da aorta destinatário e suturados no lugar usando end-to-end anastomoses. Para atingir esse objetivo com sucesso requer um alto grau de concentração, boas ferramentas, uma mão firme, e uma apreciação de quão facilmente avasculatura de um rato pode ser danificado, resultando em trombose. Aprender esses princípios importantes é o que ocupa a maior parte do tempo o iniciante no aprendizado de microcirurgia em pequenos roedores. Ao longo deste protocolo, que se referem a esses pontos importantes. Este modelo pode ser utilizado para estudar a doença vascular numa variedade de diferentes sistemas experimentais ^1-8. No contexto mostrado aqui, que é mais frequentemente usado para o estudo de pós-transplante, doença vascular, uma complicação a longo prazo comum de transplantação de órgãos sólidos nos quais a hiperplasia da íntima ocorre dentro do aloenxerto. A principal vantagem do modelo é que ele facilita a análise morfométrica quantitativa e o vaso transplantado fica contíguo ao vaso endógeno, que pode servir como um controle adicional ^9. A técnica mostrada aqui é mais frequentemente usado para ratos pesando 18-25 gramas. Temos acumulado mais de nossa experiência usando o C57BL/6J, BALB / cJ e linhagens C3H/HeJ.

Protocolo

1. Preparação pré-cirúrgica

1. Procedimentos cirúrgicos, não importa quão cuidadosamente feito, resultam em estresse significativo. Para minimizar os efeitos do stress, tais e de maximizar as reservas, os animais devem ser mantidos no biotério durante pelo menos 72 horas antes do uso ^10,11.
2. Instrumentos cirúrgicos, gaze, e compressas devem ser estéreis. Não é necessário o uso de luvas estéreis fornecem apenas as pontas do fio de sutura toque instrumentos ou do campo operatório.
3. Para hemostasia, é imperativo que as pressões de aperto são o mínimo necessário. Danos ao navio, devido à pressão excessiva ou manuseio irá causar trombo....

Resultados

A Figura 1 mostra um enxerto aórtico. As setas brancas indicam as linhas de sutura. Um enxerto patente irá mostrar um impulso visível. Figura 2 indica uma experiência típica em que a sobrevivência foi seguida destinatário durante um período de 56 dias. Um grupo consistia de ratos receptores do tipo selvagem (C57BL / 6 x FVB) transplantados com ratinhos BALB / c da aorta. O outro grupo, designado "KO" consiste de receptores (C57BL / 6 x FVB) deficientes em expressão de heme oxi.......

Discussão

Modelos do rato do transplante de aorta fornecer um número de vantagens, porque os ratinhos são muito bem definida imunogeneticamente ^9,12,13, e eles podem ser facilmente manipuladas para alterar a sua expressão de genes específicos, se desejado. Conforme referido na introdução, a cirurgia vascular em ratos é muito mais difícil do que a maioria dos modelos por causa do tamanho dos recipientes. Até mesmo os grandes vasos, como a aorta são geralmente não mais de 100-200 um de diâmetro interior, de modo a manipu.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Item	Companhia	Catalog No.
Grampos Vasculares	Belas Science Tools	00.396-01 (Tamanho B-1)
Dumont Fórceps	Belas Science Tools	11293-00
10-0 Needled microsuture	AROSurgical	TK-107038
Tesoura reta	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5620
Cauterizer baixa temperatura	Beaver-Visitec Internacional	8441000
Afastador auto-retenção	Instrumentos de Precisão mundo	14240