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Artigo de método

A administração intranasal de Terapêutica do SNC para Ratos Awake

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DOI:

10.3791/4440

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8 de abril de 2013

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Neste artigo

Resumo

Um método para administrar medicamentos por via intranasal aos ratinhos acordado para o objectivo de atingir o cérebro é descrito. Este método permite doses repetidas durante longos períodos, utilizando a administração intranasal de droga sem anestesia, e nariz ao cérebro de entrega com a exposição sistémica mínima.

Resumo

A administração intranasal é um método de administração de agentes terapêuticos ao sistema nervoso central (SNC). É não-invasiva e permite que as moléculas grandes que não atravessam o acesso barreira sangue-cérebro para o SNC. Drogas são diretamente direcionados para o SNC com a administração intranasal, reduzindo a exposição sistêmica e, portanto, indesejáveis ​​efeitos colaterais sistêmicos 1. Entrega do nariz para o SNC ocorre dentro de minutos ao longo de ambas as vias olfativas e trigeminais neurais através de uma via extracelular e não necessita de fármaco para se ligar a qualquer receptor ou o transporte axonal 2. A administração intranasal é um método amplamente divulgado e está sendo usado em testes clínicos em humanos 3.

A administração intranasal de drogas em modelos animais permite a avaliação inicial de distribuição farmacocinética e eficácia. Com ratos, é possível a administração de drogas para animais acordados (não-anestesiados) numa base regular usando uma especializaçãozou aderência intranasal. Entrega acordado é benéfico, pois permite que a longo prazo a administração crónica sem anestesia, leva menos tempo do que com a anestesia, e pode ser aprendido e feito por muitas pessoas para que as equipes de técnicos números podem grande dose de camundongos em períodos curtos. A eficácia de terapêuticas administradas por via intranasal, desta forma a ratinhos tem sido demonstrada em vários estudos, incluindo insulina em modelos de ratos diabéticos 4-6 e deferoxamina em modelos de ratinho de Alzheimer 7,8.

O aperto intranasal para ratos pode ser aprendido, mas não é fácil e requer prática, habilidade e um aperto preciso de efetivamente entregar drogas para o cérebro e evitar a drenagem para o pulmão e o estômago. Os ratinhos são restringidos à mão usando um scruff modificado na mão não-dominante com o gargalo realizada paralela ao chão, enquanto medicamento é fornecida com uma pipeta utilizando a mão dominante. Ele normalmente leva 3-4 semanas de aclimatação antes de lidar com ratospode ser realizada com este aperto sem uma resposta ao estresse. Nós preparamos este vídeo JoVE para fazer esta técnica administração intranasal mais acessível.

Protocolo

1. Aclimatação a manipulação para administração intranasal de Ratos Awake

Introdução

Mice devem ser aclimatados a manipulação por um período de 2-4 semanas antes do início da administração intranasal. Aclimatação a manipulação é importante, pois ajuda a garantir uma posição correta do corpo para a eficácia máxima de entrega de drogas acordado intranasal. Além disso, os ratos que não tenham sido adequadamente acostumados a esse processo pode ter uma reacção grave ansiedade após a administração. Mice deve passar de cerca de 2-3 dias em cada uma das nove passos antes de avançar para o passo seguinte, dependendo de con....

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Resultados

Existem várias formas de determinar a eficácia de entrega de drogas. O primeiro é para administrar por via intranasal uma tinta, tais como tinta ou India azul de metileno e de visualizar o corante após eutanásia do animal dentro do epitélio olfactivo e depois o cérebro é retirado, entrar no SNC através da placa cribiforme. A segunda é a de medir a droga administrada quer através de uma etiqueta de rádio-marcado ou através de ELISA de detecção da molécula não etiquetada. Um bom exemplo de distribuição de droga no sistema.......

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Discussão

Este método mostra como os ratos podem ser administradas doses regulares de droga intranasal para atingir o cérebro sem o uso de anestesia. Droga intranasal podem ser entregues para grandes grupos de ratinhos durante longos períodos de tempo com um mínimo de esforço. Um grupo único de até 20 ratinhos por via intranasal podem ser tratados por uma única pessoa, em menos de uma hora. Uma ampla variedade de moléculas, desde pequenas quelantes de ferro para os factores de crescimento para as células estaminais mesenquimais, .......

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Divulgações

Não há conflitos de interesse declarados.

Agradecimentos

Os autores gostariam de agradecer ao HealthPartners Animal Care Institucional e Comitê de Uso do Hospital Regiões.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Pipetador P20 ajustado em 6 μl
Pontas de pipeta para carregamento de géis
Cronômetro
Recipiente descartável para pontas
Folha de dosagem para anotações
Caneta
Fármaco e veículo
Recipiente para segurar os frascos do fármaco
Animais a serem dosados
Luvas sobressalentes
Papel toalha para limpar urina
Tabela 3. Materiais Necessários

Referências

  1. Dhuria, S. V., Hanson, L. R., Frey, W. H. 2nd Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations. J. Pharm Sci. 99, 1654-1673 (2010).
  2. Thorne, R. G., Pronk, G. J., Padmanabhan, V., Frey, W. H. 2nd

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Reimpressões e permissões

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