Antígenos funcionais protegidos glóbulos vermelhos pela membrana enxerto de compactos Poligliceróis hiper

Resumo

A modificação da membrana celular das células vermelhas do sangue (RBC) com poliglicerol hiper-ramificado (HPG) é apresentada. Hemácias modificadas foram caracterizadas por partição de fase aquosa dois, fragilidade osmótica e lise mediada pelo complemento. A camuflagem de proteínas de superfície e antígenos foi avaliada usando a citometria de fluxo e Sistema de Digitação Micro (MTS) cartões de fenotipagem de sangue.

Resumo

Transfusão de células vermelhas do sangue (RBC) é vital para o tratamento de um certo número de agudos e crónicos problemas médicos, tais como a talassemia major e anemia falciforme ^1-3. Devido à presença de grande número de antigénios na superfície de RBC (~ 308 antigénios conhecidos ^4), os pacientes no tratamento crónico de transfusão de sangue desenvolvem aloanticorpos devido à falta de correspondência antigénios menores sobre os glóbulos vermelhos transfundidos ^{4, 5.} A enxertia de polímeros hidrofílicos tais como polietileno glicol (PEG) e hiper-ramificado de poliglicerol (HPG) forma uma camada de exclusão da membrana de RBC que impede a interacção dos anticorpos com antigénios de superfície, sem afectar a passagem de moléculas pequenas, tais como o oxigénio, a glucose, e os iões de ^3. Actualmente, nenhum método disponível para a geração de células de dador universal vermelhas do sangue, em parte, por causa da grande desafio apresentado pela presença de um grande número de antigénios (proteínas e hidratos de carbono com base) sobre a superfície e o RBC desenvolvimento de tais métodos irá melhorar significativamente a segurança das transfusões, e melhorar drasticamente a disponibilidade eo uso de hemácias. Neste relatório, as experiências que são usados ​​para desenvolver antigénios protegidas RBCs funcionais pela membrana de enxerto de HPG e sua caracterização são apresentados. HPGs são altamente biocompatíveis polímeros compactas ^{6, 7,} e espera-se estar situado no glicocálice celular que rodeia a membrana lipídica ^{8, 9} e os antigénios de superfície da máscara ^{10, 11} de RBC.

Protocolo

A. Modificação poliglicerol hiper (SS-HPG)

1. Lugar liofilizado HPG 60 kDa (0,5 g, 0,0083 mmol) em um balão de fundo redondo e secar durante a noite sob vácuo a 90 ° C.
2. Refrigerar o balão até à temperatura ambiente e dissolve-se o HPG secas em piridina anidra (3 ml).
3. Para funcionalizar aproximadamente oito grupos hidroxilo em grupos carboxilo com HPG, adicionar uma quantidade catalítica de dimetilaminopiridina (uma gota de 5 mg / ml de solução em piridina) para a solução de HPG. A esta mistura, adiciona-se anidrido succínico (0,0067 g, 0,0664 mmol) dissolvido em 0,5 ml de piridina gota sábio, durante 10 min. Agita-se a mistura durante a no....

Resultados

Camuflagem de antígeno Rhesus D e proteína de superfície CD47 RBC foram quantificadas por citometria de fluxo utilizando anticorpos marcados fluorescentes monoclonais, e um resultado representativo é apresentado na Figura 1. Em caso de HPG-enxertadas RBCs (cinzento), a intensidade do sinal de diminuição (pico deslocado para a esquerda) em comparação com o controle de RBCs (vermelho e verde), indicando uma diminuição na ligação de anticorpos à superfície celular, que indicam o mascaramento de proteínas d.......

Discussão

Hemácias de doadores universais têm um grande potencial na disponibilidade de sangue e segurança para melhorar a terapia de transfusão de sangue. RBCs também são considerados veículos de entrega de drogas promissoras, devido à sua circulação longa e biocompatibilidade inerente ^{14, 15.} Experiências apresentadas neste trabalho avaliar in vitro as características de HPG RBCs modificados. A propriedades in vitro e in vivo em circulação de RBCs HPG modificados têm sido .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Glycidol	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Trimethylolpropane	Fluka		(ON, Canada)
Metilato de potássio	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Piridina anidra	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
4-dimetilaminopiridina	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Anidrido succínico	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Acetona	Fisher Scientific		(ON, Canada)
Dimetilformamida anidra	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
N-hidroxi-succinimida	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
N, N'-diisopropilcarbodiimida	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
MTS cartões			Micro Typing System (MTS) cartões (FL, EUA)
Dextran 500 kDa	Pharmacia Fine Chemicals		(Suécia)
PEG 8 kDa	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
FITC monoclonal anti-Rhesus D (RhD)	Biodiagnostics quociente		(PA, EUA)
PE monoclonal anti-CD47	BD Biosciences		(NJ, EUA)
Reagente de Drabkin	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
			Tabela. Os produtos químicos e reagentes utilizados para a enxertia de polímeros de HPG RBC membrana e a sua análise.