Artigo de método
Principais pré-adipócitos brancos isolados de tecidos adiposos brancos em ratos podem ser diferenciadas em células bege / brite. Apresentado aqui é um sistema modelo celular fiável para estudar a regulação molecular de "escurecimento" da gordura branca.
Adipócitos marrons tem a capacidade de dissociar a cadeia respiratória nas mitocôndrias e dissipar a energia química na forma de calor. Desenvolvimento da UCP1-positivos adipócitos marrons em tecidos adiposos brancos (as chamadas células bege ou brite) é altamente induzida por uma variedade de estímulos ambientais, tais como a exposição ao frio ou crónica por agonistas PPARy, portanto, esse tipo de célula tem potencial como um alvo terapêutico para tratamento da obesidade. Embora a maioria das linhas de adipócitos imortalizados não pode recapitular o processo de "escurecimento" da gordura branca na cultura, os adipócitos primários isolados da fração vascular estromal no tecido adiposo subcutâneo branco (WAT) fornecer um sistema confiável celular para estudar o controle molecular de bege / brite desenvolvimento de células . Aqui descrevemos um protocolo para isolamento eficaz de pré-adipócitos primários e para a indução de diferenciação de células bege / brite em cultura. O efeito de escurecimento pode ser avaliada através da expressão de marca selectiva gordura marromers como UCP1.
A obesidade é dramaticamente mundial de aumento e agora é considerado uma das preocupações mais graves para a saúde pública 1. Esta condição está relacionada a um desequilíbrio em relação a ingestão de energia a despesa e resulta em excesso de energia armazenada como lípidos em tecido adiposo branco (WAT). WAT alargada está associada com aumento da massa corporal e do peso, enquanto que o tecido adiposo castanho tem a capacidade de dissipar o excesso de energia para produção de calor. Daí BAT pode funcionar como proteção contra o frio e obesidade 2,3. Isto é conseguido através do desacoplamento de transporte de electrões das mitocôndrias p....
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1. Prepare Médio Digestão
Fazer 5 ml por 5 ratinhos por tecido (aproximadamente 1 ml / 1 g de tecido adiposo).
2. Dissecar tecido adiposo de ratos
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Browning dos adipócitos primários pode ser acessado através da medição expressão de mRNA de UCP1 e outros genes marrons de gordura específica ou selectiva por qRT-PCR. Apresentado na Figura 1 são dados de expressão genética em inguinais WAT-adipócitos primários derivados. As células foram induzidas a diferenciar-se em presença de duas doses diferentes de rosiglitazona a 50 nM e 500 nM, respectivamente. Um subconjunto de células foi tratado com forscolina a 10 uM, durante 4 horas antes da colhei.......
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Aqui apresentamos um sistema confiável celular para estudar o desenvolvimento de células bege / brite em adipócitos primários cultivados em camundongos. Em comparação com várias linhas de células imortalizadas disponíveis, este sistema é susceptível de oferecer relevância melhorada para o escurecimento do branco gordura in vivo.
Mesmo que o estudo desses adipócitos primários oferece algumas vantagens, também existem algumas limitações e preocupações que são importantes a considerar........
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Os autores declaram que não têm interesses conflitantes financeiros.
Agradecemos Haruya Ohno, Kosaku Shinoda, Louis Sharp, Emi Tomoda, e Lauren Ruiz para discussão, ajuda técnica e assistência editorial no manuscrito. Este trabalho foi suportado por concessões do NIH (DK087853), do Programa de Pesquisa Biomédica e de ruptura de Asubio Pharm Inc. para SKULA foi apoiado por uma AÇÃO bolsas de doutoramento da Universidade de Copenhague e da UE FP7 projeto Diabat (SAÚDE-F2 -2.011-278373) Lise de Madsen e Kristiansen Karsten. Reconhecemos também o DERC centro de subvenção (NIH P30 DK063720).
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Reagente | |||
| D Collaginase | Roche | 11088874103 | |
| Dispase II | Roche | 04942078001 | |
| CaCl 2 | |||
| Meio DMEM | Pescador | 10.017-CV | Com 2,5 g de glucose / l de L-glutamina e sem piruvato de sódio |
| Insulina | |||
| T3 (3,3 ',5-triiodo-L-tironina) | Sigma | T-2877 | |
| Indometacina | Sigma | I-7378 | |
| Dexametasona | Sigma | D-1756 | |
| IBMX | Sigma | I-5879 | |
| Rosiglitazona | Sigma | R-2408 | |
| Equipamento | |||
| Pratos de colágeno revestidas | BD | 354450 | Placas de 10 cm |
| 70 um filtro | BD Falcon | 352350 | Célula coador, 70 um nylon 1/ea |
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