Este mês de setembro no JoVE, pesquisadores da Escola de Medicina da Universidade Livre de Berlim demonstram um novo método para estudar como pacientes com AVC compensam defeitos do campo visual. Para isso, nossos autores utilizam um simulador de direção completo, com freios, volante e setas. Utilizando software de simulação de direção e rastreamento ocular sofisticado, os pesquisadores podem comparar o comportamento visual de pacientes com AVC enquanto eles navegam por percursos de direção virtuais com diferentes graus de complexidade. Embora o infarto da artéria cerebral posterior possa levar a déficits visuais semelhantes em pacientes, alguns conseguem navegar pelos percursos de direção desenvolvendo movimentos oculares compensatórios, enquanto outros colidem com obstáculos perigosos, como javalis. Por meio da análise do comportamento visual compensatório empregado pelos pacientes, nossos autores veem grande potencial no uso da simulação de direção como uma ferramenta para reabilitar pacientes com AVC que tentam superar as áreas cegas em seus campos visuais.
Em colaboração com a Universidade da Califórnia do Sul, pesquisadores do Departamento de Oftalmologia da Universidade de Ciências da Saúde do Oregon apresentam um método para medir o fluxo sanguíneo total na retina utilizando a tomografia de coerência óptica Doppler (OCT). A retina contém milhões de neurônios que capturam imagens visuais e as convertem em sinais elétricos, os quais viajam pelo nervo óptico até o cérebro. Vasos sanguíneos entram na retina no disco óptico, onde o nervo óptico se conecta à retina. Esses vasos fornecem oxigênio e nutrientes, além de removerem resíduos. Em algumas doenças retinianas (como a retinopatia diabética) ou no glaucoma (que afeta o nervo óptico), a vasculatura retiniana pode ser anormal. Como essas doenças são causas principais de perda irreversível da visão, as medições do fluxo sanguíneo retiniano podem ser muito úteis na prática clínica e na pesquisa. Diferentemente dos métodos tradicionais de imagem óptica, como o Doppler a laser e o Doppler colorido por ultrassom, a OCT Doppler a laser pode fornecer medidas absolutas do fluxo sanguíneo retiniano; essas medidas são baseadas na luz deslocada pelo efeito Doppler, que é retroespalhada por células vermelhas do sangue enquanto fluem pelos vasos. Nossos autores demonstram como escanear a retina e o disco óptico com OCT Doppler; os exames são então classificados e analisados com o software DOCTORC, desenvolvido por nossos autores. Este método apresenta boa reprodutibilidade entre avaliadores e métodos. Além disso, em olhos com glaucoma, as medidas de fluxo sanguíneo retiniano estão altamente correlacionadas com a perda visual. Assim, a OCT Doppler representa uma ferramenta poderosa que pode ser utilizada na pesquisa e na prática clínica em oftalmologia.
Coincidindo com a temporada de mosquitos, pesquisadores do Departamento de Entomologia da Virginia Tech demonstram uma técnica simples e robusta para mapeamento cromossômico de genomas de mosquitos. Dentre mais de 40 gêneros de mosquitos contendo milhares de espécies, os pesquisadores têm particular interesse nos gêneros Anopheles, Aedese Culex porque contêm espécies que transmitem doenças humanas nocivas. Cerca de 90% do Anopheles gambia genoma foi mapeado em locais cromossômicos; no entanto, é extremamente difícil preparar espalhamentos cromossômicos adequados para os Aedes gênero ou o Culex gênero utilizando linhagens celulares e técnicas padrão. Para superar esse problema, nossos autores utilizam larvas de mosquito do 4º estágio, que possuem discos imaginais capazes de produzir espalhamentos cromossômicos de alta qualidade. Os pesquisadores demonstram como dissecar os discos imaginais e preparar preparações cromossômicas adequadas para hibridização fluorescente in situ in situ híbridação (FISH). O mapeamento genômico é, portanto, possível para mosquitos dos gêneros Aedes, Culex, e Anopheles gêneros. Esta técnica abriu caminho para que os entomologistas elaborassem mapas cromossômicos precisos não apenas para mosquitos, mas também para outros insetos.
No Centro de Pesquisa da Universidade de Laval, em Quebec, pesquisadores demonstram um método para rastrear a migração neuronal no prosencéfalo de camundongos. Um local importante de neurogênese no cérebro de mamíferos é a zona subventricular, e os neurônios recém-formados migram para longe dessa região através do trajeto migratório rostral até o bulbo olfatório. As células são marcadas com um retrovírus injetado estereotaxicamente, que codifica uma proteína verde fluorescente; em seguida, por meio de uma combinação de preparo de fatias agudas, imageamento com lapso de tempo e análise de imagens, nossos autores conseguem calcular a velocidade de migração dos neuroblastos marcados. Por meio do rastreamento cuidadoso das trajetórias celulares ao longo dos vasos sanguíneos, este método pode ajudar a elucidar os diferentes sinais moleculares e mecanismos celulares que influenciam a migração celular.
Este breve resumo destaca apenas alguns artigos em vídeo notáveis que serão lançados este setembro na JoVE. Também apresentamos métodos para rastrear o destino celular em peixes-zebra com proteínas fluorescentes fotoconvertíveis, usar micropipetas para testar a rigidez celular e imagens do comportamento de proteínas que respondem a danos no DNA.