Summary
Här beskriver vi en ljus-mörk preferens test för Drosophila larv. Denna analys ger information om medfödda och dygnsrytm reglering av ljus avkänning och bearbetning photobehavior.
Abstract
Lätta fungerar som miljö-signal för att styra djurs beteende på olika nivåer. Den Drosophila larver nervsystemet används som en unik modell för att svara på grundläggande frågor om hur lätt information bearbetas och delas mellan snabba och dygnsrytm beteenden. Drosophila larver visa en stereotyp undvikande beteende när de utsätts för ljus. För att undersöka ljus anhörig beteenden jämförelsevis enkla ljus-mörker preferens tester kan tillämpas. I ryggradsdjur och leddjur nervbanor involverade i avkänning och bearbetning av visuell input överlappar delvis med de bearbetning fotiska dygnsrytm information. Den fascinerande frågan om hur ljuset avkänning systemet och dygnsrytm systemet samverkar för att hålla beteendemässiga utgångar samordnas fortfarande till stor del outforskat. Drosophila är ett påkörande biologisk modell för att närma sig dessa frågor, på grund av ett litet antal nervceller i hjärnan och tillgängligheten av genetiska verktyg för neuronal manipulation. Den presenterade ljus-mörker preferenser analysen möjliggör undersökning av en rad visuella beteenden inklusive dygnsrytm kontroll phototaxis.
Introduction
Här beskriver vi en beteendevetenskaplig analys baserad på larver föredrar mörk (eller ljus). Larver reagerar med en stark och stereotypa photonegative svar under födosök faser (L1 till början L3) 1. Analysen syftar till att bedöma photophobic beteendet hos larven och jämför det ljus eller mörk preferens för en grupp av larver röra sig fritt i en Petri-skål belagd med agar. Detta beteende analys inte bara ger information om känsligheten, integration och tidsmässiga plasticitet i det visuella systemet, ger det ytterligare tips om hur ljuskänslighet och dess process styrs av dygnsrytm systemet.
Den Drosophila larver öga (även benämnd Bowlig Orgel, BO), är den viktigaste organ för ljusperception. Varje öga är sammansatt av 12 fotoreceptorer (PR), åtta PRs uttrycker grön-känsliga rhodopsin6 (RH6) och fyra PRs uttrycker den blå-känsliga rhodopsin5 (RH5) 2,3. Förutom PRs, also klass IV multidendritic neuroner, som täcker larvkroppen väggen, har identifierats för att reagera på skadliga ljusintensiteter 4,5. Det är också känt att pacemaker neuroner belägna i den centrala larval hjärnan uttrycker den ljuskänsliga proteinet kryptokrom (Cry) som fungerar som klocka inneboende blå ljussensor i hjärnan 6,7. Fängslande photophobicity av vildtyp djur visar en dygnsrytm komponent vid olika tidpunkter under dagen och natten när man testar med denna analys. Svar på bakgrund av födosök L3 larv uppvisade starkare photophobicity i gryningen och lägre photophobicity i skymningen när den testades ljus-mörker preferenser 7. Intressant bara RH5-PRs krävs för lätt undvikande, medan RH6-PRs är umbärliga. Båda, RH5-PRs och RH6-PRs är involverade i att återställa den molekylära klockan genom ljus 8. Den Cry vägen måste samordnas med de andra ljuskänsliga vägar att orkestrera en lämplig beteendevetenskaplig produktionen idagens lopp. Acetylkolin i PRs spelar en viktig roll i ljuset undvikande beteende samt infångning av molekylära klockan. Blockering acetylkolin neurotransmission från PRs till dygnsrytm pacemaker nervceller minskar photophobic svaret i ljuset-mörkret föredrar analys 8. Använda samma analys, har två symmetriska par av nervceller har nyligen identifierats att växla ljuset föredrar det tredje larver instar av Drosophila 9. Dessa två par nervceller kan fungera under sena larvstadier, när djuren lämnar mat till förmodligen hitta en lämplig pupariation webbplats. Dock kvarstår frågan om hur de visuella vägar interagera och styra larver visuella beteende i en dygnsrytm sätt i stort sett obesvarad. Ljuset företräde analysen möjliggör jämförelser mellan dygnsrytm tidpunkter, flyga linjer och dygnsrytm tillstånd under olika ljus kvaliteter. Analysen är lätt förberedda och billig och har varit nyttig tidigare jagn flera laboratorier för att beskriva och studera ljuset härrör beteende i larven.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Ett. Larver Uppfödning
- Håll flyga stammar eller genetiska korsningar i masskultur vid 25 ° C på majsmjöl medium under en 12-timmars ljus-12-hr mörker-cykel i en fluga inkubator försedd med ljus och timer.
- Späd backer jäst i vatten för att bilda en flytande pasta (10 g backer jäst späddes med 3-4 ml destillerat H2O). Lägg en liten droppe till majsmjöl mat och täcka flaskorna. Låt torka i minst en timme för att undvika att vuxna flugor fastnar jästen pastan. Att sätta en liten droppe av jäst utspätt i vatten på ytan av livsmedlet kan förbättra äggläggning. Alternativt bagare jäst pasta, 20% ättiksyra (AcOH) (Sigma Aldrich, Schweiz A6283-100ML) kan användas. För detta, doppa spetsen på en tops på lösningen och sprids på majsmjöl livsmedelsytan.
- Placera vuxna flugor (minst fyra dagar gammal, men inte äldre än tio dagar) i livsmedel majsmjöl flaskor. Sätt tillräckligt många vuxna i varje rör för att erhålla tillräcklig larver att upprepa önskemåltesta flera gånger och låt statistisk jämförelse. För genetiska korsningar, använder vi oftast minst 20 honor och 5-10 hanar per flaska, men vissa linjer kräver fler kvinnor att erhålla en tillräcklig larver avkomma.
- Låt vuxna att lägga ägg under 12 timmar och överföra dem till nya flaskor. Vuxna kan överföras på morgonen och kvällen. Vi överlåter i regel vuxna i sju till tio dagar, och vid behov ta nya vuxna.
- Håll ägget samlingarna tas var 12 h i inkubatorn och låt växa larverna vid 25 ° C, 12-timmars ljus-12-hr mörker och 60% luftfuktighet. För att testa för dygnsrytm komponenter av visuella beteende flytta larver till konstant mörker (DD) 48 timmar efter insamling av ägg (motsvarande två ljus-mörker-cykler). För detta, använd en separat inkubator utan ljus men behålla alla andra förhållanden såsom temperatur och luftfuktighet identiska. Var noga med att överföra flaskorna till DD inkubatorn strax före övergången till den mörka fasen. Innan du flyttar flaskorna till annatER inkubator satte flaskor i en kartong eller linda rören med aluminiumfolie för att förhindra ljusexponering under överföringen (packning i kartong eller förpackning måste ske under "ljus-på fasen" före övergången mellan inkubatorer). Förhindra att djuren något ljus exponering efter denna tidpunkt och fram experiment start.
- Efter 4 dagar (84-108 tim från äggläggning) samla tidigt L3 (utfodring larver) vid tidpunkter som skall testas (se 4. Lätt preferens testet, punkt. 4.4.).
2. Test Setup
- Utföra experiment i ett mörkt rum med konstant temperatur och luftfuktighet.
- För att hålla två kvadranter av petriskål i mörker, täcka locket med svart tejp och aluminiumfolie. För att göra detta, markera mitten av locket omkrets. Också markera fyra punkter i gränsen av locket med 90 ° separation mellan dem. För att göra det enklare, dra en 20 cm kvadrat indelad i fyra kvadranter av 10 cm längd på enpappersark eller med hjälp av en dator. Klipp 10 cm kvadrater av aluminiumfolie och svart tejp (Figur 1A). Täck två motsatta kvadranter genom limning en kvadrat av aluminiumfolie, som första skikt och svart tejp som täcker det, vara noga med att också omfatta gränsen av locket.
Under de senaste två något skilda former av dessa analyser användes. Vi använder här den "kvartal-plate"-analys, där petriskål är uppdelad i fyra lika stora fjärdedelar 10. I andra hand "halv-platta" analysen petriskål delas hälften (halv utsätts för ljus, hälften i mörker) 1,7,8. Tills idag inga signifikanta skillnader mellan de två analyserna har publicerats. - Limma en kvadrant ark såsom den som används för märkning locken rakt under ljuskällan på bordet. Markera omkretsen av en petriskål centrerad på kvadranter skärningspunkt. Använda märkena som referens för att placera testplattan alltid i samma position under ljuskällan.
- Installera enlampa, antingen en enkel vit glödlampa (Phillips, Softtone 5W) eller en LED-lampa (LED-lampa, 80012 Vit, Osram) ovanför petriskål med hjälp av ett strykjärn stödstativet (Fisher Scientific, S47808). Justera höjden på ett sätt att hela testplattan homogent lyser. Vi rekommenderar starkt användning av LED-lampor eftersom de avger mer specifika våglängder än konventionella glödlampor. Dessutom Lysdioder avger mindre värme.
- Justera ljusintensiteten med hjälp av en fotometer (Miljö Meter PCE EM882). För att uppnå den erforderliga ljusintensiteten på 350-760 lux, flytta lampan upp eller ner efter behov. Ansluta lampan till en justerbar strömförsörjning ger större flexibilitet att ändra intensiteten utan att flytta lampan (figur 1B).
Tre. Plattor Framställning
- Gör 200 ml 2,5% agar (Sigma-Aldrich, Schweiz A5093-500G) med dubbeldestillerat vatten (Millipore).
- Placera petriskålar på ett bord (90-mm diameter;Greiner Bio-One GmbH, till 4550 Kremsmeinster, Österrike) i rader kan hälla hett agaros.
- Koka upp agaros i en mikrovågsugn tills lösningen är helt transparent och vätska. Se till att flytande lösning inte innehåller bubblor. VARNING: Transport försiktigt till bordet eftersom lösningen kan vara mycket varm!
- Häll hett agaros i de petriskålar tills hela ytan är homogent täckt med ett tunt lager av lösningen, ungefär två eller tre millimeter är tillräckligt. Var snabb att förhindra agaros stelnar före beläggning alla plåtar. Låt plattorna svalna. Förvara plattorna i rumstemperatur och använd dem bara på samma dag av förberedelser.
4. Ljus preferens Test
- Arbetet inom röda ljusförhållanden i experimentet utrymme för att förhindra ljus inflytande innan testet eftersom Drosophila inte kan avkänna röda ljusvåglängder. Använd en röd glödlampa (Phillips, PFE712E * 8) är monterad i en lampa för att belysa tHan lägger till jobbet.
- Behåll temperatur genom alla experiment vid 25 ° C. Kontroll rumstemperaturen med hjälp av ett värmeelement eller kylanordning om det behövs.
- Ta lite mat från flaskorna som föds upp för två dagars cykler vid konstant mörker (från avsnitt 1). Eftersom larver vanligtvis gräva på ytan av livsmedlet, ta det översta skiktet (ca 5 mm djup) med hjälp av en spatel (Fisher Scientific, 14 till 373-25A). Sprid maten på den yttre sidan av en petriskål lock, tillsätt lite vatten och blanda försiktigt med spateln.
- Samla mata L3 larver från maten. Som ljus företräde kommer att testas, väljer endast tidigt / utfodring L3 larver är avgörande eftersom den negativa phototaxis garanteras. Sen / vandrande L3 larver eller stora larven kryper på maten förmodligen redan bytt sin photobehavior. Utfodring L3 larver (negativ phototactic) kan kännas igen genom att de främre spiracles är öppna och stack på utsidan i ett finger-liknande form. Den bakre spiracles har tre öppningar vardera och fyra grupper av stora grenade hår. Spottkörtlarna omfatta andra buken segmentet 11. Staging larv i mikroskop är bekvämt medan inget vitt ljus bör användas. Ett rött ljus lampan är nödvändigt att belysa larverna om mellanstationer enligt stereoskopiska mikroskop innan experimenten krävs.
- Tvätta larver snabbt i kranvatten och samla tidig utfodring tredje stadiet larver (fortfarande i rött ljus). Innan du överför larverna på prov plattan, ta larverna med en våt pensel och försiktigt absorberar överflödigt vatten med en pappershandduk eller filterpapper. Torka inte larver alltför överdrivet eftersom det skulle kunna skada djuret och påverka dess beteende.
- Använda våta pensel försiktigt överföra larver till plattorna. Placera en grupp av cirka 30 larver i mitten av plattan. Täck plattan med locket redan förberett med kvadranterna och ställa plåten under ljuskällan redo för experiment (se sektion 2).
- Slå på vitt ljus lampan och starta timern. Låt larven röra sig fritt på plattan i 5 min, sedan snabbt avlägsna locket och räkna antalet larver i mörker och i de ljusa kvadranter. Märkning läget för varje larv med en markör kan underlätta rösträkningen. Alternativt ta en bild av plattan och räkna i efterhand. Larver som visar oklart lätt preferens, liksom larver kryper på väggarna eller gräva i agar bör betraktas som neutral smak och bara ingå i det totala antalet larver när ljuset företräde index beräknas.
- Efter att ha räknat, kasta tallriken med larver och ersätta med ett nytt test platta för nästa experiment. Samla används plattor i en autoklav plastpåse för senare hantering och destruktion.
- När du har utfört ett tillräckligt antal experiment en ny genotyp kan testas. 10-15 försök per genotyp är tillräckliga för analys.
Fem. Data analysis
- För enkelhetens överföra data till ett datablad som Excel (Microsoft) eller Origin (Origin Lab) på en dator för vidare statistisk analys. Arrange i en kolumn av antalet djur i mörker, i en andra kolonn antalet djur i ljusa kvadranter och i det tredje summan av djur i plattan (inklusive "neutral" larver).
- Beräkna preferens index (PREF) för mörkret för varje experiment med användning av följande formel:
PREF (mörker) = (antalet larver i mörker - antalet larver i ljus) / totalt antal larver - Jämför statistiskt en uppsättning data med en lämplig analys för grupper. Här använder vi ett Wilcoxon test för att jämföra statistiskt två grupper. En ANOVA testet med en Tukeys multipel-jämförelse post hoc test kan göras, om normalfördelning antagande är uppfyllt i ett grenrör grupp jämförelse.
- Gör grafer som visar tydligt jämförelser mellan linjer och punkter tiden längs den dagen cykeln. We användning Ursprung Software (Origin Lab) för att testa statistisk signifikans och generera lämpliga grafer, men någon annan statistisk programvara kan vara till hjälp.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Efter ovan beskrivna protokollet, testade vi ljus-mörker preferens i början av tredje larver stadion av vildtyp Canton-S flyger vid två olika dygnsrytm gånger CT0 och CT12. Vuxna föddes upp 12-timmars ljus-12-hr mörk och vänster för att lägga ägg under 12 timmar. Larver växa de första två dagarna under samma ljus-mörker regimen. Eftersom vi ville testa dygnsrytm modulering under konstanta förhållanden (lösspringande av dygnsrytm klocka), har larver överförs sedan till konstant mörker för de kommande tre dagarna tills test utfördes (Figur 3A).
Här använde vi 350 lux eftersom det har visat att detta är den optimala ljusintensiteten att detektera skillnader av ljus svaret hos Drosophila larv längs cirkadiska cykeln i jämförelse med andra intensiteter (70 och 600 lux) 7. Skillnader i ljuskänslighet, och därför i ljuset respons observeras vid jämförelse CT0 med CT12. I Drosophila, CT0 sammanfallers med gryningen, är halva cykeln mellan CT0-CT12 betraktas engelska dagen och från CT12 till CT24 engelska natten 12. Ljus ljuskänslighet är högre kort efter övergången från mörker till ljus, då nästan 77% av larverna föredrar mörkret jämfört med nästan 69% av mörk företräde vid tidiga subjektiva natten (Figur 3B). Detta återspeglas också av den mörka föredrar index (pref (mörker)) beräknas med formeln ovan presenterade för varje experiment. Snittar alla repetitioner vi fått en förkärlek index på 0,52 för CT0 och 0,36 för CT12. Använda Wilcoxon testet (Origin) en statistiskt signifikant skillnad mellan två tidpunkter visas (p = 0,0229).
Figur 1. (A) Märkning kvadranter i petriskål lock. Kvadranter kan märkas i petriskål locket med hjälp av en tryckt kvadrant används som duk. Posteriort det första lagret av aluminiumfolie kan limmas på den yttre ytan av plattan och vara täckt med svart band i de två motsatta kvadranter för mörker. (B) Schematisk inrättas för ljus och mörker önskemål testet. (C) A Petri skål täckt med mörka kvadranter och fylld med 2,5% agar, redo att användas för experiment. Klicka här för att visa en större bild .
Figur 2. Ljus-mörker preferens testet, exempel på en maträtt direkt efter inställning larv på testet plattan (Start) och efter 5 min (End). Vanligtvis använder vi en grupp på 30 djur för varje experiment.
tp_upload/50237/50237fig3.jpg "alt =" Bild 3 "fo: innehåll-width =" 5.5in "fo-src =" / files/ftp_upload/50237/50237fig3highres.jpg "/>
Figur 3. (A) Ljus regim följde testa ljus preferens i utfodring L3 larv. (B) Procent av mörk preferens för båda tidpunkterna testat (CT0 och CT12). Procent av larven som föredragen mörker och ljus räknas för varje repetition och alla repetitioner genomsnitt. Larver i gränser plattan eller gräva på agar betraktas som neutral. (C) Mörk preferens index beräknats för samma tidpunkter. Signifikant statistisk skillnad mellan grupperna visas av Wilcoxon sum-rank test (p <0,05). (N = 18 (540 larver) per tidpunkt). Klicka här för att visa en större bild .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ljuset företräde beskrivna testet drar fördel av larver medfödda photobehavior. Analysen är lätt att etablera, gör många repetitioner till låg kostnad och levererar värdefull information om Ijuskännande bearbetning. Den experimentella paradigm tillåter relativt snabb kvantifiering av hur många individer föredrar ljus eller mörk. Sådana önskemål kan visas som råa procentsatser eller alternativt som Preference Index (PREF). Den PREF uttrycks som skillnaden av djur som föredragen ljus och djur som föredragen mörker dividerat med den totala av djur.
En avgörande punkt för ljuset föredrar testet är varaktigheten av experimenten. Här testade vi fem minuter, men det är möjligt att andra genotyper eller under andra lätta kvaliteter skillnaderna är inte så tydlig med detta experiment varaktighet. För vissa stimuli (smak) vi har insett att längre experiment, med 20 min varaktighet, leverera renare företrädesrättCES med mindre variabilitet. Testa olika experimentella löptider kan vara rättvis speciellt när man använder genotyper där rörelseförmåga eller känsligheten påverkas och larver kräver längre tid att utforska provplåten. I så fall bör tiden vara lika justerat för kontroller och experimentella genotyper.
Analysen kan också upptäcka skillnader mellan tidpunkter på dagen genom dygnscykeln som visas här och i tidigare rapporter 7,13. Lätta reaktioner på fotiska stimuli är starkt reglerade av dygnsrytm klocka, förmodligen genom att modulera känslighet fotoreceptorer. Larvernas responser för ljus minskning under de första två timmarna på dagen och blir stabil under de återstående tio timmarna av den lätta fasen. Att jämföra olika grupper under dagen, är det viktigt att göra experiment på likvärdiga eller identiska tidpunkter i dygnsrytm cykel för varje grupp. Dessutom är det också viktigt att undvika förändringar somkan påverka larver beteende, som termiska fluktuationer eller lätta ingångar tidigare till experiment om arbetar i mörker. För detta är det viktigt att föda larverna vid samma temperatur och fuktighet än de som används för experiment och vara försiktig genom att hålla djur i mörker när det behövs.
Minst tre nyligen beskrivna vägar bidrar till Ijusavkännande i Drosophila larv 5,14: 1) det rodopsin beroende systemet förmedlas av larver ögat, 2) de multidendritic nervceller klass IV, sprids längs larvkroppen och 3) klocka inneboende blå ljussensorer uttryckande Cry. Bidrag av olika ljuskänsliga banor för visuell beteende kan åtgärdas genom inställningen som beskrivs här. Olika ljuskällor med särskilda stödnivåer och våglängder kan användas för att testa olika lätta kvaliteter. Denna möjlighet kan bero på information om känsligheten hos de enskilda elementen i Ijusavkännande systemet end hur sådana lätta ingångar bearbetas. För en mer detaljerad experiment om ljus stimulering, kan analysen lätt modifieras för att testa olika lätta kvaliteter. Ökande och minskande ljusintensitet, samt testa olika ljusvåglängder är möjligt genom att använda egentillverkade LED-lampor med specifika våglängder (många möjligheter finns på marknaden). Kontroll av sådana lampor med nätaggregat erbjuder ett bra utbud av intensiteter. Dessa möjligheter att manipulera ljus kvaliteter ger ett brett spektrum av variabler som ska testas med ljuset företräde testet.
Dessutom Drosophila larver kan associera straff eller belöningar med antingen ljus eller mörker, ändra deras infödda photobehavior 15. För detta, har en anpassning av den beskrivna använda protokollet som visar mångsidigheten av analysen. Sammanfattningsvis är det ljust-mörkt preferens testa ett värdefullt instrument som bidrar med en bättre förståelse för snabboch dygnsrytm beteenden som härrör från lätta stimuli och vilka delar av det ljuskänsliga systemet och dygnsrytm klocka av Drosophila larv är involverade i denna process.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att lämna ut.
Acknowledgments
Vi tackar våra kollegor vid Biologiska institutionen, universitetet i Fribourg för givande diskussioner. Vi tackar Bloomington Stock Centrum för att ge flugan bestånd. Detta arbete har genomförts med finansiellt stöd från den schweiziska National Science Foundation (PP00P3_123339) och Velux stiftelsen SGS
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Agar | Sigma-Aldrich | A5093-500G | 2.5%; Sigma-Aldrich, 9471 Buchs, Switzerland |
| Petri dishes | Greiner Bio-One GmbH | 633180 | 90-mm diameter; Greiner Bio-One GmbH, 4550 Kremsmeinster, Austria |
| LEDs Lamp | OSARAM | 80012 White | LED lamp, 80012 White |
| Environment Meter | PCE | PCE EM882 | Lux, Temp, RH% |
| Thermostatic cabinet | Aqua Lytic (Liebherr) | ET636-6 | |
| Light timer | Timer T | 6185.104 | 230V/50HZ (check specifications for your country) |
| Universal thermostat | Conrad | UT200 | |
| Humidifier | Boneco | ||
| Balck tape | Tesa | 5 cm | |
| Glue | Uhu | ||
| lncubator lamp | Phillips | Softtone | 5W |
| Timer clock | Ziliss | Ziliss, Switzerland | |
| Excel Software | Microsoft | Excel | |
| Origin Software 8.5 | OriginLab | ||
| Backer Yeast | Migros Switzerland | ||
| Iron support stand 17X28CM | Fisher Scientific | S47808 | |
| Acetic acid | Sigma Aldrich | A6283-100ML | 20% acetic acid dilluted in H2O |
| Red light lamp | Phillips | PFE712E*8C | |
| Spatula | Fisher Scientific | 14-373-25A | |
| Power supply | EA | EA PS 2042-06B | Optional |
| Aluminium foil | Prix Coop | ||
| Heater | GOON | NSB200C | |
| Microwave Oven | Intertronic | ||
| Standard corn meal fly food | |||
| Destilled water |
References
- Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development. J. Neurogenet. 10, 119-135 (1995).
- Sprecher, S. G., Pichaud, F., Desplan, C. Adult and larval photoreceptors use different mechanisms to specify the same Rhodopsin fates. Genes Dev. 21, 2182-2195 (2007).
- Sprecher, S. G., Desplan, C. Switch of rhodopsin expression in terminally differentiated Drosophila sensory neurons. Nature. 454, 533-537 (2008).
- Xiang, Y., et al. Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall. Nature. 468, 921-926 (2010).
- Diaz, N. N., Sprecher, S. G.
- Emery, P., et al. Drosophila CRY is a deep brain circadian photoreceptor. Neuron. 26, 493-504 (2000).
- Mazzoni, E. O., Desplan, C., Blau, J. Circadian pacemaker neurons transmit and modulate visual information to control a rapid behavioral response. Neuron. 45, 293-300 (2005).
- Keene, A. C., et al. Distinct visual pathways mediate Drosophila larval light avoidance and circadian clock entrainment. J. Neurosci. 31, 6527-6534 (2011).
- Gong, Z. F., et al. Two Pairs of Neurons in the Central Brain Control Drosophila Innate Light Preference. Science. 330, 499-502 (2010).
- Lilly, M., Carlson, J. smellblind: a gene required for Drosophila olfaction. Genetics. 124, 293-302 (1990).
- Bodenstein, D. The postembryonic development of Drosophila. Biology of Drosophila. Demerec, M. , John Wiley & Sons. 275-367 (1950).
- Pittendrigh, C. S. Circadian systems: Entrainment. Biological Rhythms. 4 Handbook of Behavioral Neurobiology, Plenum. 95-124 (1981).
- Collins, B., Kane, E. A., Reeves, D. C., Akabas, M. H., Blau, J. Balance of Activity between LN(v)s and Glutamatergic Dorsal Clock Neurons Promotes Robust Circadian Rhythms in Drosophila. Neuron. 74, 706-718 (2012).
- Keene, A. C., Sprecher, S. G. Seeing the light: photobehavior in fruit fly larvae. Trends Neurosci. 35, 104-110 (2012).
- von Essen, A. M., Pauls, D., Thum, A. S., Sprecher, S. G. Capacity of visual classical conditioning in Drosophila larvae. Behav. Neurosci. 125, 921-929 (2011).
